单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,主讲人：马静,班级：食品,2,班,学号：,02,奶制品中防腐剂山梨酸和苯甲酸的测定,高效液相色谱法,主要内容,实验背景,食品防腐剂可以抑制食品中的微生物的繁殖或杀灭食品中的微生物，苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是常用的食品防腐剂但如果添加过量，会破坏食品中的营养成分，不仅能破坏维生素,B1,还能使钙形成不溶性物质,影响人体对钙的吸收,同时对人的胃肠有刺激作用,过量食用还可引发癌症苯甲酸的毒性远远大于山梨酸,但因苯甲酸在酸性条件下抑菌范围广,以及价格低廉,仍作为主要防腐剂加入到食品中但是苯甲酸是不允许在乳制品中添加的然而近年来中国奶制品大多被检出苯甲酸，虽然含量不高，但足以影响婴儿等特殊人群的健康性状与性能,山梨酸,苯甲酸,无色晶体粉末，相对分子质量为：,112.13,，熔点,132,135,，沸点,228,，耐光耐热性好，难溶于水，溶于乙醇，乙醚，花生油和丙酮白色晶体，相对分子质量为,144.11,，熔点,121.7,，沸点,249.2,，常温下难溶于水，溶于热水，乙醇，氯仿，乙醚，丙酮，二硫化碳等。
食品中测定防腐剂方法的比较,食品中测定防腐剂方法的选择,检测苯甲酸和山梨酸一般采用薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法薄层色谱法是一种定性半定量的测定方法，虽然灵敏度高但重现性差气相色谱样品处理工作量大、试剂毒性强，且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大，使标准系列线性差，最低检出限较高对于含量低或稀释倍数大的样品无法检测，而液相色谱法样品处理相对简单另外，高效液相色谱因采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比具有很高的柱效和分离能力故本实验采用高效液相色谱法测定防腐剂的含量高效液相法的测定过程,仪器及试剂,仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）微量进样器（,100um,）,超声波发生器,;,溶剂过滤器,;,0.45,m,滤膜,;,容量瓶,;,恒温水浴锅,试剂：液态奶饮料；奶粉；甲醇（色谱纯）；稀氨水（,1:1,）,氢氧化钠溶液（,0.1mol/L,）,;,亚铁氰化钾溶液（,0.2mol/L,）,醋酸锌溶液；磷酸盐缓冲溶液；标准贮备液：苯甲酸,(1mg/mL),山梨酸（,1mg/mL,）,;,混合标准工作液（苯甲酸,+,山梨酸）,0.2mg/mL,山梨酸、苯甲酸的提取,置于,加入,溶解,加入,加入,静置,液相色谱条件,柱子,:Eclipse XD13-C18,柱,(4.6mm150mm,，,5m);,流动相,:,磷酸盐缓冲溶液,-,甲醇,(V/V90:10);,等梯度洗脱,;,流速,0.3ml/min;,保留时间,15min;,柱温,35;,进样量,20 ul;,紫外检测波长,227nm,；,实验步骤,1.,混合标准液的配置,分别移取混合标准工作,0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4.00ml,5.00ml,5.00ml,于,6,个容量瓶（,10ml,），稀释定容。
2.,流动相处理,流动相用,0.45 um,水相滤膜进行减压过滤和超声脱气处理,3.,开机 出现平直基线 进样,4.,定性分析,分别进苯甲酸,山梨酸标准溶液,10uL,确定各个峰保留时间,5.,标准曲线测定,分别吸取,60uL,的苯甲酸和山梨酸混合标准液进样，建立定量分析表,6.,样品分析,取样品,60uL,进样，记录保留时间和峰面积,标准色谱图,液相色谱仪使用注意事项,(1),使用高效液相色谱级的溶剂与试剂，溶剂和水必须进行过滤2),必须对含有缓冲盐的流动相进行过滤（,0.45um,）3),流动相使用前必须脱气4),改变流动相时防止交叉污染5),不要使用陈旧的流动相，定期清洗流动相储液瓶6),定期清洗烧结不锈钢吸滤头7),防止过高压力冲击色谱柱8),每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐，防止无机盐沉积和样品微粒磨损阀转子9),严禁使用气相色谱那样的尖头针进样10),在注射针前加装针式过滤器，防止样品中的微粒进入进样阀,(11),色谱柱不用卸下前,:a.,必须洗去缓冲液；,b.,防止产生微生物；,c.,用大于,10%,的有机溶剂充满整个色谱柱；,d.,柱卸下后用柱堵头将色谱柱首尾密封。
参考文献,1.,祝伟霞,魏蔚,杨冀州,刘亚风,高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸,中国国境卫生检疫杂志,2005,年,10,月第,28,卷第,5,期,2.,周毅刚,龙苏,王晓春,等,.,高效液相法测定食品中苯甲酸和山梨酸含量,.,中国医师杂志,2001,13(3):184-188,3.,全国标准化委员会,.GB/T5009.29-2003,食品中山梨酸、苹甲酸测测定方法,.,北京,:,中国标准出版社,2003,The End,。