血管紧张素原及胰岛素生长因子-1在糖尿病肾病进展中作用的研究 单位代码:分类号:.学 号:密级:公开需却乒硕士学位论文血管紧张素原及胰岛素生长因子一在糖尿病肾病进展中作用的研究赵谭研究生姓名吴玉梅主任医师导师姓名内科学肾脏病学学科领域:.南奎芰医学与生命科学学院院所在学山东省医学科学院医学硕士申请学位级别年月时 间辩论,?......四 . ?,,.. ,硕士生导师简介 吴玉梅,主任医师,毕业于上海第二军医大学,硕士研究生导师, 擅长治疗原发、继发肾小球肾炎、肾病综合症、小血管炎等肾脏疾病, 并有自己的独特的治疗方案,在血液净化技术方面能独当一面,开展 了多项新技术年任山东省医学科学院肾内科硕士生导师现指 导数名硕士研究生工作以来,注重临床工作经验的总结,积极开展 新技术,接受新知识,屡次参加全国肾脏病年会、华东地区肾脏病年 会及本省的各种学术会议,并屡次在大会上发言交流,受到了同行的 高度评价发表省级以上论文数十篇,参与编写专著两部,完成市级 科研工程数项,屡次荣获市级科研进步奖现申请省级科研工程项, 山东省十二五科技攻关工程一糖尿病肾病联盟成员之一。
课题指导小组成员 孙树印,男,年月,主任医师,肾脏病专业 周清华,女,年月,主任医师,肾脏病专业原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独 立进行研究所取得的成果除文中已经注明引用的内容外,本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果对本文的研 究作出重要奉献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明本人完 全意识到本声明的法律责任由本人承当 论文作者签名: 熊尘墓 曰期: ,,力 护弓.. 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解济南大学有关保存、使用学位论文的规定,同意学 校保存或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论 文被查阅和借鉴;本人授权济南大学可以将学位论文的全部或局部内 容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保 存论文和汇编本学位论文 囱公开 口保密 年,解密后应遵守此规定 论文作者签名:递导师签名:济南大学硕士学位论文录目摘要??..??工主要符号表.??.??..前言...........??.?..目舌.??..?一第一局部糖尿病肾病患者血清和尿液、一的测定.....研究对象?..方法??...统计学方法...结果?.?.第二局部、一在糖尿病肾病大鼠血清、尿液及肾组织中的检测??...研究对象?.方法??..统计学方法..结果??.讨论..结论??..?....参考文献附录?.??.综述一..综述二..攻读硕士学位期间完成的学术论文?..致谢.??..??.....血管紧张素原与胰岛素生长因子在糖尿病肾病进展中作用的研究 血管紧张素原及胰岛素生长因子一在糖尿病肾病进展中作 用的研究 专业:内科学肾脏病学 研究生:赵谭 导师:吴玉梅主任医师 摘要 目的研究血管紧张素原,及胰岛素生长因子 .,.在糖尿病肾病发生、开展中的作用。
方法选取年月至年月在济宁市第一人民医院肾内科、内分 泌科住院并均符合年糖尿病及糖尿病肾病诊断标准的患者例 为实验组,男,例,女,例,除外均肿瘤、结核、肝损害、足、其 他内分泌代谢疾病、手术、外伤或其他应激情况等,并排除最近个月内服用血 管紧张素转换酶抑制剂和/或血管紧张素受体拮抗剂触国的患者 根据肾脏病变情况,将观察对象分为早期糖尿病肾病组例和临床糖尿病肾 病组例,并设相匹配健康体检者例为对照组,男,例,女,例 采用酶联免疫吸附法法检测例受试者血清和尿液中的、.. 水平采用空腹单次无菌腹腔注射新配制链脲菌素,建立 糖尿病肾病大鼠模型同样用法检测不同时期周、周大鼠血清 和尿液中的、.水平,用免疫组织化学技术和计算机图像分析系统检测 模型组和对照组不同时期周、周大鼠肾脏组织中、.的蛋白表 达情况 结果、早期糖尿病肾病组组及临床糖尿病肾病组组较 正常对照组组,血清、.水平明显升高,差异有统计学意义 .;组及组较组,尿、一水平明显升高,且随 着病情的进展明显升高,差异有统计学意义.模型组大鼠随着病程 济南大学硕士学位论文的延长,周末较周末的尿白蛋白排泄量明显增加,且模型组较同期对照组均明显增加,小时尿白蛋白是的诊断标准之一,其改变符合的病变开展的趋势,肾脏肾小球体积早期增大,到后期明显缩小,肾小球结构明显破坏。
模型组血清较对照组早期明显升高,尿较对照组明显升高,血清.较对照组显著下降,尿.较对照组显著升高,差异有统计学意义户.二者肾组织中均有、.的表达,且主要表达在肾小管上皮细胞胞浆内,免疫组织化学技术分析显示,在正常大鼠肾组织中的表达较少,在模型组肾组织上的表达逐渐增多,模型组肾组织中.蛋白水平表达明显强于对照组,但随着病程的延长逐渐下降,与对照组比拟表达显著增强,差异均有统计学意义尸.结论和.参与了糖尿病肾病的发病机制,并促进了糖尿病肾病的开展,而.的变化提示其与早期糖尿病肾病的病变有关,因此,抑制和.的表达,可能为早期防治提供新的途径关键词:血管紧张素原;胰岛素生长因子.;糖尿病肾病:免疫组化;法血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究 ?? ?: 一 .: ?’.,, ,. ,,?/? .,. . 一、 , 一.:、 、一 , .. 济南大学硕士学位论文皇曼皇曼鼻鲁皇曼曼皇皇曼量鼍曼量量寡量甍鼍鼍曼量曼曼皇皇曼鼍鼍曼曼量皇曼量邑量鲁皇皇 舅鱼量曼寰曼邑曼曼曼曼曼曼鲁皇曹皇毫 ,,..、 ,, .、 一、, ...一 ..: 一一,, .::; ; ; 主要符号表中文名称缩略语 英文名称血管紧张素原胰岛素样生长因子一. ?糖尿病糖尿病肾病终末期肾病?空腹血糖尿白蛋白排泄率血清肌酐。
子素一血管紧张素系统血管紧张素转换酶、、Ⅲ 血管紧张素、、Ⅲ、、Ⅲ 西. 胰岛素样生长因子结合蛋白生长激素转化生长因子一 苏木素.伊红既酶联免疫吸附法世乔卫生组织济南大学硕士学位论文.▲厶?刖盖糖尿病是一种终身性疾病,其主要特征是血糖显著高于正常的水平型的特点是机体不分泌胰岛素,而型贝是机体胰岛素分泌缺乏或产生胰岛素抵抗目前,随着社会经济的开展,患病率逐渐增加,已成为严重的世界性问题,对公众健康的危害程度已上升至慢性非传染性疾病的第三位国际联盟的最新数据显示,全球患者目前已增至.亿人,预计在年内将到达近亿人华医学会学分会,于年~年间对中国个省市自治区的名岁以上人群进行筛查,发现和前期的患病率分别为.%和.%估计中国患者目前己达万人,且中国的流行病学调查显示,中国岁以上的人群型患病率达.%且约/的患者糖化血红蛋白得不到有效控制乜,约%的患者因未被及时诊断而未能早进行有效的治疗和指导,可见,已成为严重影响国人身心健康的主要公共卫生问题特别是其慢性并发症也严重影响了患者的生活质量,甚至威胁患者的生命,给社会、家庭、患者带来沉重的经济负担,这些慢性并发症不仅成为致残、致死的主要原因,而且也是造成医疗费用的急剧增长的原因之一。
我国进行的及前期慢性并发症的调查说明,微循环中的视网膜病变和肾脏病变以及周围神经病变、外周血管病变在新诊断人群中的患病率分别为.%、.%、.%和.%,而这些慢性并发症在前期人群中的患病率也已到达约.%、.%、.%和.%,可见,的慢性并发症在的早期就已有可能发生,因此,做到的早发现、早诊断、早预防是至关重要的近年来全世界社会经济的快速开展,居民生活水平的提高,的患病率呈直线上升的趋势,据最新统计,目前全球约有亿糖尿病患者,且由于目前治疗方式的改善,生存时间的延长,糖尿病肾病及其他并发症也相应增加是糖尿病主要的微血管并发症,其呈慢性进行性进展,最终可导致终末期肾功能衰竭,是糖尿病患者的主要死亡原因之一在美国,占终末期肾功能衰竭的首位,约为%,在欧洲约占的%,日本约占%】型糖尿病患者的发生率约%,型糖尿病患者的发生率在%左右,但血管紧张素原与胰岛素生长因子在糖尿病肾病进展中作用的研究由于糖尿病患者中,型病人发病率远超过型,故在糖尿病肾衰透析患者中型病人占%%我国的患病率约为%,其中早期肾病%,临床肾病.%,肾功能不全.%,尿毒症.%因此进一步探索其发病机制,及时有效的控制的发生与进展,做到早诊断、早治疗,是当前临床研究面临的一个重要内容。
而的发病机理较为复杂,有多种因素参与,目前认为体内各种细胞因子的合成与分泌与的发生与开展有关,如何介入打破这些因子的作用成为治疗的关键其中.是一种对机体的生长发育和代谢具有广泛作用的蛋白,通过对.与的关系的研究发现,.在的发生开展中有一定的作用,但研究结果不一且肾素.血管紧张素系统的作用一直是研究的热点,近年来作为系统的唯一作用底物,逐渐受到了学者们的关注,研究发现在慢性肾脏病的发生与开展中起着重要的作用,但其与的关系尚未完全明确本课题通过测定患者的血清和尿液中、.的浓度,发现其较非肾病组有明显变化,并进一步制造动物模型,测定动物模型的血清和尿液中、.的浓度及在肾组织中的定位研究,明确和.在发病中的作用,这些研究结果能在蛋白质水平解释的发病机制,为拓宽防治途径提供实验依据,进而减少开展为终末期肾衰的发生率,减轻患者住院费用,提高患者的生活质量及生存时间,造福于糖尿病患者济南大学硕士学位论文第一局部糖尿病肾病患者血清和尿液、.的测定.研究对象..对象及分组山东省医学科学院附属济宁市第一人民医院肾内科、内分泌科年月至年月住院的例患者为实验组均符合年糖尿病及糖尿病肾病诊断标准,男,例,女,例。
根据肾脏病变情况,将观察对象分为早期糖尿病肾病组和临床糖尿病肾病组,其中早期糖尿病肾病组组,尿蛋白定性为阴性且尿白蛋白排泄率./,且血肌酐正常/例,男例,女例,平均年龄±岁临床糖尿病肾病组组,尿蛋白定性为阳性或尿蛋白排泄率/,且血肌酐正常或升高例,男例,女例,平均年龄±岁,采血时均无泌尿系感染或其他肾病、心力衰竭、肿瘤,周内未发生糖尿病酮症酸中毒或其他糖尿病急性合并症设例,男,例,女,例,平均年龄±岁,为相匹配的在本院健康体检者作为对照组组排除标准及诊断标准...排除标准:所选研究对象均除外合并可能影响一水平的因素肿瘤、结核、肝损害、足、其他内分泌代谢疾病、手术、外伤或其他应激情况等,及影响水平的因素最近个月内服用血管紧张素转换酶抑制剂和/或血管紧张素受体拮抗剂铷姬糖尿病的诊断标准:具有典型病症,空腹血糖≥.//. /或餐后血糖芝//;没有典型病症,仅空腹血糖≥./或餐后血糖≥. //应再重复一次,仍达以上值者,可以确诊为糖尿病;没有典型病症,仅空腹血糖≥.//或餐后血糖≥. ./‖者,可//或糖耐量实验小时血糖≥一以确诊为耱尿病血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究...根据型的病情进展把糖尿病肾病分为五期:期??肾体积增大,肾小球入球小动脉扩张,肾血流量增加,肾小球内压增加,增高。
这些改变可能与血糖水平密切相关,经胰岛素治疗可以得到部分缓解期??病史年,肾小球基膜增厚,系膜基质增加,正常,但运动后/期??临床早期,上述病变和静息时一/加重,仍高于正常或正常期??临床,出现持续性蛋白尿,/,病理上出现.结节,降低而仍可正常,临床上可有高血压及大量蛋白尿期??慢性肾功能衰竭,降低,增高临床上一般把分为早期和临床期分期主要依据尿白蛋白排泄多少,分为微量白蛋白尿期和大量蛋白尿期近年来,根据长期的研究和随访,对型糖尿病的患者在整个开展过程中有了一个更全面的了解,具体分期见上文对于型糖尿病患者往往不能确定发病的具体时间,以及缺乏长期的随访资料,所以没有具体的分期,现分期参考型糖尿病方法..主要实验器材普通冰箱.型,公司超低温冰箱..,公司离心机,上海手术器械厂全自动生化分析仪型,美国贝克曼公司尿微量白蛋白/糖化血红蛋白分析仪,德国拜耳电热恒温水浴箱.型,杭州中拓仪器公司酶标分析仪型,微量振荡器.,上海天呈科技济南大学硕士学位论文加样吸头多个.,北京思齐生物科技洗板机,芬兰雅培血糖仪: 美国雅培公司..主要实验试剂尿微量白蛋白测定试剂盒,北京利得曼生化技术血糖试纸,美国雅培公司进口分装试剂盒,北京中杉金桥生物.进口分装试剂盒,北京中杉金桥生物的测定..血清和尿液、...标本收集:采集清晨肘静脉血.,并留取清晨尿,分别置于非抗凝管中,离心后,吸取上清液分装密封.冰箱保存以备成批检测、.。
同时送中心实验室用全自动生化分析仪检测空腹血糖、肾功能,并用尿微量白蛋白/糖化血红蛋白分析仪检测尿白蛋白排泄率及糖化血红蛋白取出所有试剂和血清、尿液标本并恢复至室温或.测定的具体步骤:标准品稀释与加样:在酶标包被板上,设个标准品孔,然后在第、孔中分别加标准品,再在第、孔中加标准品稀释液各,混匀;从第、孔中分别取加到第、孔,再在第、孔中分别加标准品稀释液,混匀;从第、孔中各取弃掉,再各取分别加到第、孔中,再在第、孔中分另标准品稀释液,混匀;混匀后从第、孔中各取分别加到第、孔中,再在第、中分别加标准品稀释液;混匀后从第、孔中分别取加到第、中,再在第、孔分别加标准品稀释液;混匀后从第、孔中各取弃掉稀释后每孔液体量都为,浓度依次为/,/‖, /, ‖瑚,加样:分别设空白孔空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同、待测样品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液,然后血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究再加待测样样品最终稀释度为倍加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀温育:用封板膜封板后置温育分钟配液:将倍浓缩洗涤液用蒸馏水倍稀释后备用洗涤:轻轻揭掉封板膜,弃去液体,甩干,再在每孔中参加洗涤液,静置秒后弃去,重复次后拍干。
加酶:每孔参加酶标试剂,除外空白孔温育:操作同上洗涤:操作同上显色:每孔先后参加显色剂、各,避光显色分钟终止:每孔加终止液;液体颜色可由蓝色转为黄色测定:以空白孔调零,波长依次测量各孔的值或.的检测均为精确的定量检测,可根据标准曲线直接读出所测量的或.浓度以上操作均由专业技术人员严格按照说明书要求进行检验统计学方法应用.进行统计学分析,所有结果用均数±标准差±表示,各组间比拟经方差齐性检验后采用单因素方差分析,相关分析采用相关分析法,.为差异有统计学意义结果..在各组研究对象中,进行了根本资料的收集和比拟,各组间年龄、血压无统计学差异,.,各组间血糖、血肌酐差异显著,.,见表表各组患者一般情况和检测指标的比拟±组 组 值 尸值组工程...±. ...±.年龄岁....搴 ..枣..空腹血糖/. ..±.木..枣餐后血糖/.....±.木 .±幸..糖化血红蛋白%. ..... .±.收缩压. ... .±..±.舒张压...扩.血肌酐/注:与组比拟,幸尸.;与组比拟,.各组尿白蛋白排泄率的比拟:随着病情的进展,各组患者尿白蛋白排泄率逐渐增加,各组间比拟差异均有统计学差异,.,见表表各组尿白蛋白排泄率比拟工±组 值 户值组组.... .±.轳尿白蛋白排泄率../注:与组比拟,幸.;与组比拟,肇.。
附图:血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究 薯嚣斟 蹦〞::一、蠢?嚣;■?辩剿瓣 :蠹辩鞋’嬲黧搿≈鬻?鼗嚣群舔辫掌耩萋蠹§ 鬻黼趱燃 蠹蠹鬟熬嚣垂 黼燃 麟戳豢 ≯叫抓§瓣搿∞&制蒺粼麓獬;§耀?≈?.¨娜、黼张麟?一、 ,疆麓雠罐罐蠹鼗辩§删四搿箍四搿瓣畿瓣?嚣 麓黼鼹强 黼〞一一、鬻,滋攀囊辫蓉鬻攀攀;瓣濡鬻羹鬻 鬻鬻澜渊瀚黼溺辫篓鋈燃 掰糊 脯目嘲 ;搿¨,〞彝’ ‘’鬻,?“鬻鬻鬻鬻 瓣黧纛 黼 豳黼囊 ,愈瓣渊“囊蘩黼徽黜§蠢鬻 ?? 黔‘〞〞越 一“■?‘∞洲∞“;;?嚣 黼 麟黼艄 ※?;:‘’;“一一 ≥鬃鬻羹 豳 黼燃纛 、黜端、黧瓢??、‘§戴戮?鬣瓣瓣目麟蓬蠢戮囊 四燃 斯〞一“一誊辩 一%髑瓣赫溅誊糍尊§鞭瓤黼’?搿搿囊毫蚌?’‘“‘“‘ 囊罐蒜≈?黼馨黼 ?一 四 〞囊鼍鬓、芝豢嚣誊惭诮糍簸嚣鞭萋嚣蓉鬻?豢鬻瓣瓣 .鬻戮燃绥鬻蠢鬻瓣赣鬃戮攀攀羹纂 懑四 鬻四∞四.∞辫 ?耋;鍪警蠢添.?荔前鏊懑鬻麟鬻溺麟豳辫瀚黧缀麟凌霪囊麓 黼燃鬟冀嚣 、鬻 组组组图各组间尿白蛋白排泄率的比拟. ..各组水平的比拟:早期糖尿病肾病组和临床期糖尿病肾病组的患 者的血水平显著高于正常对照组尸.。
早期糖尿病肾病患者的尿 水平显著高于正常对照组.,并且随着病情的进展,临床期糖尿病肾病 的患者的尿水平显著高于早期糖尿病肾病患者. 表各组血和尿水平比拟± 组别 例数 血/ 尿/ 组组组值尸值 .±. .±. ....±. .±. .. ..注:与组比拟,幸氏.;与组比拟,撑. 附图: 固..济南大学硕士学位论文 厂???????????????????????????一一?????????????????????????????? 血./ “?〞群辅?翰群黼一〞〞攀鬻霪羹豢鬟一§蘩董粼 ?、‘?’‘‘‘鬻’州??Ⅺ鬻??鍪 ’勰一%誓¨、÷群? 麟菱灌鋈饕慧 四 、,,锋秽,雏豳 瓤 篱§§囊豢 譬薹囊溅§篱辫瓣 溺四蕊 嚣;褥魏蒸; 蛳§;尊瓣黼嚣嚣四螽寮裁嚣瓣 黼黼 囊薅蕊薹薹鬻鍪婪 Ⅵ, ≯ 、、豳 戮麓黛羹蒸 鞠 黼懿翱黼囊 鬻零?麓Ⅻ“≮鼎姆辨%〞龄帮呻∞“ , 尊誊§?∞, 端? ’“≈榭藏萎腑,?篱藏燕蠹蜊““ “’“鬻黧“黧攀鬻四麟鬻霎簇瀚然羹羹戮鬻 :、;嚣鬻篱 ■ 四四 鼬嘲辫黼 目弱溪熏黧黧熏 鍪燃 隧黼 %四霪翦鬻蘸 黪麓蠢囊勰爨爨鬟夔舞 ¨:粼≤精嚣撼徽?§四磷端 雾瀚 溺蒸 鬻毽甄鬻囊 盖叠越蠢谶 一警薹蠹?繇鬃※糕繁 ,黑¨¨誊冀帮赫搿 图各组间血清血管紧张素原的比拟. 组图各组间尿血管紧张素原的比拟. ..各组.水平的比拟:早期糖尿病肾病组和临床期糖尿病肾病组的患 者的血.水平显著高于正常对照组尸.。
早期糖尿病肾病患者的尿. 水平显著高于正常对照组.,并且临床期糖尿病肾病的患者的尿. 水平显著高于早期型糖尿病肾病患者尸. ∞加∞踟∞如加 ∞踟∞∞加∞踟∞∞加 ●血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究 表各组血和尿.水平比拟± 注:与组比拟,宰砌.;与组比拟,. 附图: 溪饔鎏薹爹誉黍鏊篓蒸鬟 ;雾鎏蘩黧鬟羹蘸 ¨趟锚黝蕊鬣纂囊羹孽瓣瓣蠢〞麴戮鞭鬻躐瓣;麓蘩囊蕊嚣彗嚣四八§麟聪涮 笺黧,、;;怒鬻攀鬻辫鬟鬓◇ 愁鬻蒺囊 鞘瓣 蕊篓篱囊篓囊圈 鬻鬻黪羹鬻戮攀鋈鬻 瓣;饕黼辘※羹鞘 薯溷 蒸豢鬻 骚 鬻辫爨箨鬻鬻蕤囊鬻鬻 薹?薹萋 :鬻蘩夔蘩;鬻鎏鬻鬻 鬻〞〞∞糍;疆 鬻黼熬懿雾舔翳鬻 鬓 ‘’≈“≈〞?四鬟攀嬲 黪鬻 ,擞∞巍’弘 组 组组图各组间血清胰岛素生长因子.的比拟. 尿/ 篆慧鬻囊鬻蒸鬻‘篱鬻戮 一鬻鬻§鬻簇篱熬骥麓黥麟≤ 麟瓣剿 黧露蘩一一 .;“〞蓊黪鞭攀“裟彗羹鬻缀』『鬻篱霾糕熬鬻鬻骚笺≥薹麓 二 羹麟鬻冀鬻鬻錾纂鬻骥 鬻鬻溺 鬻缀鬻戮黼疆襄鬻 囊湖 鬻鬻瓣黼鬻麟 麓黼 、:∞,一巍鬻 鲻 绥鬻鬻鬟鬻篓鬻羹羹鬻 瓣 ‘、鬻“攀嬲辩:『鬻囊篡鬻鬻麓鬻鬻鬻獭辫囊 .譬一 。
〞鬻鬟,攀熏囊戮 醚戳六熬渊瓣黼潍 ‖一、 ≥蔓冀并≯÷. 鬻鬻??鬻鬻黪薹蒌戮黧萎攀鬟嚣瓣鞲辑 錾羹豢麟 饕瓣黼藜.鋈粪蒸 麟 辩’蒜 ’:〞’一 荔鬻黼藜鬃 ?鞴一 ,秣 罄萎簸纂萋蓦薯蠢蠡誊篱瓣耩嚣豢 ;霾黧魏二翁 组组图各组间尿胰岛素生长因子.的比拟. 组济南大学硕士学位论文..、一和各检测指标的相关因素分析:型.患者的血清与尿、无相关性,相关系数分别为../.、..,尿与呈正相关,相关系数为.尸.:型患者的血清.与尿.无相关性,相关系数为..尸.,血清.与呈负相关,相关系数为...,尿.与呈正相关,相关系数为..血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究第二局部、.在糖尿病肾病大鼠血清、尿液及肾组织中的检测.研究对象..对象及分组雄性 大鼠只,体重,购于山东省鲁抗医药股份,以普通大鼠饲料喂养,饮用自来水,动物房温度控制在.,光暗周期为时正常昼夜节律级动物房普通饲料适应性喂养周后,只大鼠随机分为造模组和对照组,分别按不同观察时间周、周再分为组,造模组每时间点只,对照组每时间点只模型建立造模组大鼠空腹单次无菌腹腔注射新配锘溶于.,.的无菌枸橼酸.柠檬酸钠缓冲液/体重,后大鼠尾静脉采血测,./确定糖尿病大鼠,周后/,确认为大鼠模型制备成功;对照组大鼠腹腔注射等剂量的枸橼酸.柠檬酸钠缓冲液。
所有实验大‘鼠分笼饲养,均给予普通饲料喂养、自由饮水;室温约℃,相对湿度约%,每日光照时,实验室内通风良好方法..主要实验器材超低温冰箱..,公司离一机,上海手术器械厂全自动生化分析仪型,美国贝克曼公司济南大学硕士学位论文 皇量皇量量鼍曼量皇曼曼曼量皇曼曼皇 一一 量量量量皇曹等量皇鲁曼 尿微量白蛋白席化血红蛋白分析仪,德国拜耳 电热恒温水浴箱岬.型,杭州中拓仪器 酶标分析仪型, 公司 微量振荡器.,上海天呈科技 加样吸头多个.,北京思齐生物科技 石蜡切片机,德国 洗板机,芬兰 光学显微镜.,上海蔡康光学仪器 计算机图像分析系统.,北京盈盛恒泰科技 雅培血糖仪: 美国雅培公司 电子天平: 北京赛多利 石蜡切片机: 德国公司 ..主要实验试剂 链脲菌素,公司 尿微量白蛋白测定试剂盒,北京利得曼生化技术 血糖试纸,美国雅培公司 进口分装试剂盒,北京中杉金桥生物 .进口分装试剂盒,北京中杉金桥生物 免疫组化试剂盒,武汉博士德生物工程 显色试剂盒,武汉博士德生物工程 ..肾功能、小时尿微量白蛋白及血糖检测 两组大鼠分别在喂养后第、周末随机各取一半大鼠称体重,尾静脉取血 测空腹血糖,代谢笼收集大鼠时尿液测尿白蛋白排泄率,麻醉各组大鼠后, 仰卧固定,常规消毒,在无菌条件下清晨心内采血,离∑分钟转/ 分,取血清,冻存于.待成批检测相应的血清指标,收集完毕后上全自动 生化分析仪,检测肾功能;终点法钡时尿微量白蛋白:氧化酶法测血糖。
血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究..血清及尿液、的测定方法同第一局部实验..肾组织、 蛋白表达的测定...标本采集:处死大鼠,留取肾组织,别离肾脏包膜,称质量,取左肾甲醛固定,石蜡包埋,切片用染色观察肾小球形态变化,并免疫组化检测相应蛋白的表达情况石蜡切片步骤:用%的甲醛固定肾组织小时,取出后流水冲洗过夜然后,用酒精浓度梯度%、%、%、 %、%、 %、%进行脱水,后入二甲苯乙醇混合液,二甲苯 ,二甲苯适当时间进行透明,从℃的恒温箱中拿出石蜡并包埋肾组织,然后切去肾脏组织周围过多的石蜡,将已固定和修好的石蜡块装在切片机上,调整好切片厚度,切片,在的展片机中,最后进行展片、贴片、烤片及脱蜡复水,便可进行染色肾脏组织苏木精.伊红脏染色,步骤如下:二甲苯 分钟,二甲苯 分钟,二甲苯:无水乙醇: ;%乙醇,%乙醇 ;%乙醇,蒸馏水;苏木精液染色 ,流水稍洗去苏木精液. ;%盐酸乙醇.,稍水洗. ,蒸馏水过洗 ,;.%伊红液染色. ,蒸馏水稍洗. ,%乙醇稍洗.%乙醇. ,%乙醇. ,无水乙醇. ,石炭酸二甲苯.,二甲苯 ,二甲苯 ,二甲苯Ⅲ ,中性树胶封固染色结果:细胞核呈蓝色,胞浆、肌肉及结缔组织呈不同程度的红色。
及.的免疫组化染色:厚度....具体实验步骤:石蜡包埋组织切片.烤片:将待做切片置于切片架上,于℃恒温烤箱中至少烤;脱蜡:切片经二甲苯、、Ⅲ依次脱蜡次,每次;水化:切片依次经无水乙醇,%乙醇次每次,%乙醇,%乙醇水化;自来水冲洗,洗×:抗原修复:采用微波温度到达~℃法;即在微波盒中参加抗原济南大学硕士学位论文曼皇曼皇詈鼍曼皇曼曼舅一修复液,然后微波加热至其沸腾,将切片放在耐高温的塑料切片架上,放入缓冲液,中档或高档继续微波,取出微波盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片室温自然冷却,自来水冲洗,和分别洗涤×封闭:滴加封闭缓冲液, 湿盒孵育 ;加一抗:滴加用已稀释的即用型一抗,过夜:洗涤:.洗涤×;封闭:滴加封闭缓冲液,湿盒孵育;加二抗:滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗,湿盒中孵育;洗涤:.洗涤×;,湿盒孵育封闭;封闭:滴加试剂加心.:滴加用一抗稀释的.复合物:,终浓度,℃湿盒中孵育;洗涤:?洗涤×,洗涤×:显色:应用溶液显色;复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;封片:待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;观察成像:显微镜下观察成像以代替一抗作为阴性对照.... 、.在肾脏组织中的表达的判断标准:阳性染色定性标准为肾小管细胞的胞膜和/或胞质出现清晰棕黄色染色。
应用高清晰彩色病理图.图像分析系统进行分析,均以细胞文分析系统采集图像,并 膜和胞浆内棕黄色颗粒为阳性表达,计算各组大鼠所测蛋白的表达量并以平均光密度值表示统计学方法所有数据应用软件处理,结果以均数±标准差表示,各组间比拟采用方差分析,两变量间的相关关系采用直线相关分析,.为有统计学差异血管紧张素原与胰岛素生长因子?在糖尿病肾病进展中作用的研究 .结果 ..一般情况:模型组大鼠经一次腹腔注射后全部成模,且在实验 期间均出现多饮、多食、多尿、消瘦、精神萎靡、反映迟钝等现象;正常对照组 大鼠精神状况良好、生长发育正常 ..各组大鼠体重、空腹血糖、血肌酐及尿白蛋白排泄率的变化:随着病 情的进展,对照组大鼠的体重明显增加,而模型组有所下降.;造模成 功后的大鼠血糖明显升高且持续保持在较高水平,而对照组大鼠的血糖始终正 常,二组间有统计学差异.:时血肌酐较对照组无明显差异,周 时明显增高,同组间比拟有统计学差异.;造模成功大鼠尿白蛋白排泄 量明显升高,且随着病情的进展明显增加,而对照组大鼠的尿白蛋白排泄量始终 保持在正常水平,二组间比拟有统计学差异.:见表. 表各组大鼠检测指标的比拟± 注:与对照组比拟,宰尸。
与同组周比拟,. ..各组大鼠血清和尿、.水平的比拟,造模组大鼠血清水平 在不同阶段均高于对照组,尿水平在不同时间段也均高于对照组,且随着病 情的进展明显升高,各时间段比拟均有统计学差异.;造模组大鼠的血 清.水平在不同阶段均较对照组下降,且随着病情的进展持续下降,而尿 .的变化同尿的变化,因此各时间段比拟均有统计学差异.; 见表 济南大学硕士学位论文 表各组大鼠、.的比拟± 注:与对照组比拟,木尸.:与同组周比拟,捍. 附图: 图两组各阶段血清水平的变化趋势 图两组各阶段尿液水平的变化趋势 血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究图两组各阶段血清.水平的变化趋势图两组各阶段尿液.水平的变化趋势..肾脏病理改变见图.:对照组:肾小球大小较一致,数目未见明显增多,肾小球毛细血管基底膜未见明显异常,系膜区未见明显增生,肾小管及肾间质未见明显炎症细胞浸润,符合正常大鼠处死后肾脏组织正常表现图、模型组:大局部肾小球毛细血管基底膜明显增厚,系膜区基质增生、细胞增多,呈弥漫性肾小球硬化表现,肾小管上皮细胞浊肿,肾间质淤血,并有少量炎症细胞浸润,符合糖尿病肾病的病理表现图、肾组织中、.的免疫组化染色结果,见表:在肾小球、肾小管细胞中可见和.蛋白的表达呈棕色颗粒样物,且主要表达在肾小管上皮细胞,对照组大鼠肾组织中、.蛋白少量表达,模型组表达明显增加,两组间差异有显著统计学意义.。
.表各组大鼠肾脏组织、.的表达±注:与对照组比拟,尸.;与同组周比拟,肇.附图:济南大学硕士学位论文图两组各阶段肾脏组织蛋白表达的变化趋势图两组各阶段肾脏组织.蛋白表达的变化趋势..大鼠之间的相关因素分析:大鼠尿水平与肾组织蛋白的表达之间有显著相关性,相关系数为..大鼠尿水平与血清水平无显著相关性,相关系数为..血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究讨 论是最常见的并发症之一,其呈慢性进行性进展,最终可导致终末期肾功能衰竭,是糖尿病患者的主要死亡原因之一伯在美国每年进入血液透析的患者中,约%的患者是病人型和型均可发生,型患者的的发生率较高,为%%,而型患者的发病率约为%为慢性病程,其主要的临床表现是从微量白蛋白尿开展为大量白蛋白尿,一旦出现大量蛋白尿尿蛋./,肾小球功能将呈进行性不可逆转地下降美国的一项临床统计显示,年内、年内、年内分别约%、%、%的患者发生终末期肾衰,且在出现蛋白尿后患者的平均生存期为年左右的主要临床表现是从微量蛋白尿到大量蛋白尿超声波或静脉肾盂造影等影像学检查表现为肾脏体积增大,与正常人比拟可增大%左右功能性检查可发现肾小球滤过率增高,肾血浆流量及滤过分数增大,较正常人比拟可增高%左右。
肾脏病理结果显示,结节性肾小球硬化的结节可累计多个肾小球,且在单个肾小球有时也可见到多个结节,表现出肾小球塌陷,电镜下可见系膜区有基膜样物质沉积,为非特征性表现;弥漫性肾小球硬化一般表现较轻,比拟常见,且出现较早,病变范围较广,表现为肾小球系膜区及弥漫性肾小球基底膜增厚;对于患病.年的患者其肾脏组织可见有肾小球毛细血管基底膜的增厚、系膜基质沉积,出现毛细管襻折叠和融合,毛细血管阻塞等,且肾小球和肾小管均可有不同程度的代偿性增大如同其它的糖尿病微血管并发症一样,的发病机理目前尚未完全说明,而且前面也已提到,不是每个糖尿病患者都会发生,因此,积极的探索的致病因素,及时做好早期预防,不仅减少患者的痛苦、减轻经济负担,而且也可缓解社会医疗费用的增长目前人们已探索到的危险因素简述如下:.高血糖是导致发生与开展的一个根本性原因,当血糖控制良好时,局部肾脏病变可以逆转或减轻高血糖可直接作用与肾小球细胞,破坏肾小球结构,并可减低肾血管对缩血管物质的反响性,扩张肾小球人球小动脉,导致肾小球球内压增高葡萄糖可在非酶条件下,生成不可逆的晚期糖基化终末产物,可使济南大学硕士学位论文肾脏发生一系列功能和形态改变,如导致肾血管动脉硬化,改变肾脏血流;促进基底膜增厚及系膜基质的堆积甲】。
高血糖可通过促使甘油二酯生成增多而激活蛋白激酶,后者使纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原等细胞外基质合成增多高血糖尚可激活己糖通路,促使蛋白质发生糖基化,影响细胞因子的表达研究显示高血压在患者中的患病率约为普通人的倍,且无高血压的患者,其血压也会有昼夜节律,易导致高血压的发生假设高血压不能得到良好的控制,其等慢性并发症的发病率将显著增加,从而加重‘肾脏损害,促进的进展,同时肾脏的损害也可导致高血压的发生,从而形成恶性循环患者多数伴有血脂异常,并且经动物实验模型研究发现,大量的脂质物质可在肾小球沉积,且与肾小球的损伤程度呈正相关高血脂是导致血管动脉粥样硬化的主要原因之一,从而改变肾脏的血流动力学;高血脂可促进多种细胞因子和生长因子的释放,加重肾小球硬化遗传因素,上述发现不是所有的患者均可发生,研究发现型患者发生的概率较型明显增高,且有原发性高血压家族史的患者比没有原发性高血压家族史的患者发生的概率高倍,可见遗传因素在易感性方面起着重要的作用肾脏体积增大、肾小球毛细血管基底膜增厚、系膜区大量基膜样物质积聚是的根本病理改变,目前的发病机制尚未完全明确,型糖尿病为多基因性疾病,有遗传异质性胰岛素早期分泌异常或缺陷及胰岛素抵抗是糖尿病及其并发症的发病机制中两个根本环节。
胰岛素分泌异常和或胰岛素抵抗导致胰高血糖素、生长激素及等分泌增加,在持续的高血糖作用下,肾小球系、.、、血管紧张素转换酶、膜、内皮和上皮细胞的.、内皮素、等表达或活性增强,这些激素或活性物质和细胞因子构成极其复杂的网络均可促使肾小球内血流动力学改变高血压、高灌注、高滤过和基膜增厚、系膜细胞增生肥大及增多,最后导致肾小球硬化学者们认为的发病机制与体内各种细胞因子的合成与分泌密切相关,如何介入打破这些因子的作用成为治疗的关键其中.是一种对机体的生长发育和代谢具有广泛作用的蛋白,通过对.与的关系的研究发现,.在的发生发展中有一定的作用,但研究结果不一且肾素.血管紧张素系统的作用一直是研究的热点,近年来作为系统的唯一作用底物,逐渐受到了学者血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究们的关注,研究发现在慢性肾脏病的发生与开展中起着重要的作用,但其与的关系尚未完全明确是由个氨基酸构成的糖基化球蛋白,在人体内大局部为低分子量.,是目前发现的的唯一作用底物循环中的大局部由肝脏合成,近年来,发现【】汀和肾素的浓度粥:的产生速率很重要,控制着的紧张性活动经典的主要阵、肾素、、血管紧张素、血管紧张素及其相应的受体组成。
循环中的通过经典的途径,在肾素的作用下形成转变成 , 在的作用下水解为、,后者在血浆或组织中的血管紧张素酶的作用下,水解为,都是通过与血管、平滑肌、肾上腺皮质等组织的和受体结合产生起主各种生物学效应,但的代谢去除率较高,因此在中仍是要作用受体介导的生物学效应较强,可收缩血管、刺激醛固酮的释放等,从而改变血压、调节水盐平衡等受体介导较为复杂的生物反响,如参与胚胎发育等,但其在胚胎发育时期表达最为丰富,成年组织表达较少有学者观察四发现受体、受体在肾脏中都有表达,成人肾脏受体占主导地位,对肾脏约占%,而在胎儿及新生儿肾脏中,受体约占%因此,的作用主要是由山唱与受体结合介导的与受体结合可导致肾血浆流量和滤过分数增加,肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜区有基底膜基质沉积,刺激大量单核巨噬细胞的浸润,导致肾内高灌注、高流量、高滤过,从而促‘使的发生不仅循环中影响的发生与开展,肾脏局部也是一个独立的影响因素,研究说明肾脏局部产生的主要表达与近端肾小管,其分泌的进除可以直接与肾脏入肾小管管腔后,在肾素及的作用下形成 ,局部相应的受体的结合,导致肾脏高血压、高灌注、高滤过及肾血管内皮细胞增生、系膜细胞增生肥大、系膜基质增多【】外,还可诱导肾脏分泌多种细胞因子、等【引,从而进一步促进基膜增厚、系膜细如.、、?胞增生肥大、增多及肾脏血流动力学的改变,导致肾小球硬化。
研究发现,肾脏局部产生的在肾素、的作用下形成,而肾素和存在于整个肾单位中,过多的未被水解的便随尿排出,同时也随尿排出,但因济南大学硕士学位论文循环中的可通过肾小球滤过膜,并可被肾小管吸收,因此尿中的血管紧张浓度与肾脏纤维化素不能反映肾脏局部的活性,但研究显示肾内的的程度呈正相关近年来通过对麻醉大鼠的研究【 ,发现血浆中的不可能大量的通过肾小球滤过,说明尿中出现的主要是由肾脏分泌等【为证实这一观点,给高血压大鼠和正常血压大鼠灌入人,发现在血浆中可检测到人,但未在尿中检测出,说明人尿不能通过肾小球滤过或可被肾小管降解,进一步支持尿来源于近端肾小管,而不是血浆,还对血管紧张素和醋酸脱氧皮质酮分别诱导的高血压大鼠进行研究,发现尿水平的变化不依赖于尿蛋白排泄率的变化,结果显示尿的水平和肾内活性呈正相关,而肾系统的激活又是发生与开展的关键因素,因此,推测尿皂反映的损伤程度目前一些常用的指标如尿白蛋白、肾小球滤过率等可反映肾脏的损伤程度,但其敏感性低,因此,进一步的探索能够反映肾脏局部活性的敏感指标,对于的早发现、早治疗具有重要的意义是一种结构与胰岛素相似的多肽,分子量约为,主要由肝脏合成分泌,但研究显示肾脏、肌肉、肺、心脏等局部器官也可以合成。
大局部的.与胰岛素生长因子结合球蛋白以复合物的形式存在【 使.的半衰期延长,保证了血液中有均衡稳定的游离.发挥生物学效应,目前发现的有种【】,其中.是血中数量最多的结合蛋白,血浆中%的?和.结合形成复合物并且.主要是通过与结构相似的.受体结合发挥生物学效应,.受体具有酪氨酸蛋白激酶基因活性,激活多条细胞信号传导信号而发挥作用,可引起细胞的分化及增殖、抑制细胞的凋亡、加速细胞的物质代谢近几年来,许多研究说明【哼】,.可刺激肾小球系膜细胞和近端肾小管细胞的增殖,扩张微血管,从而增加肾脏的血流量和肾小球的滤过率,这可能与的发生与开展有关,也有些学者认为.在病变中发挥保护作用研究发现给诱导的糖尿病大鼠腹腔注射.周后,降低,透射电镜观察肾脏组织超微结构明显改善,证实了.的应用对糖尿病大鼠的肾脏病变有改善作用可见.与的关系密切,但其对是促进还是保护作用尚未完全明确在许多的糖尿病动物模型中发现【】,早期肾脏.水平增加,后逐渐降血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究到诱发糖尿病前的水平,这种.的二过性增加,可刺激糖尿病早期肾脏的系膜细胞增生,并促进其合成大量的纤维连接蛋白,后者进一步促进细胞的增生,从而持久的作用于系膜细胞,导致肾小球硬化。
暇】研究发现,早期大鼠的.水平表达是升高的,后逐渐恢复到正常水平,因此认为.在的发生中可能起始动作用箸】在小鼠模型中发现,从第周起肾脏的重量开始增加,且与肾脏.的增加有关,同时伴有.的增加,胰岛素治疗那么可以缓解了肾脏重量和.的增加,提示肾小球的肥大与.在肾脏的聚集以及.表达增加有关,且这种改变可能与胰岛素的缺乏有关等【】研究认为在高葡萄糖环境下,.可促进早期的系膜细胞分泌,从而舒张肾脏血管,加速肾脏的高滤过,增加肾脏的血流量,为肾脏提供氧和营养物质,抑制肾脏细胞的凋亡,加重的进展报道,.可显著增加系膜细胞对葡萄糖的摄取,摄取的过多的葡萄糖可加剧基质成分的产生,从而加重的进展但也有研究显示,.可保护胰岛细胞,抑制其凋亡,减弱细胞自身抗原的表达,从而保护其不受免疫损伤国外研究发现【,.可降低高血糖,促进肌肉细胞对葡萄糖、氨基酸的摄取,合成糖原、蛋白质、脂肪,抑制肝糖原的分解,并降低胰岛素水平,增加胰岛素受体的敏感性,.还可负反响作用于/.轴抑制的分泌,有拮抗胰岛素的作用,从而调节糖尿病的高血糖状态型糖尿病以胰岛素抵抗为主,高血糖可进一步导致肾脏的血流动力学改变,造成肾脏病变,因此理论上说,.增加型糖尿病患者对胰岛素的敏感性,显著改善胰岛素抵抗,降低血糖,可能有防止的‘发生和开展的作用,因此可见,目前.对是促进因子还是保护因子仍存在争议。
本实验研究发现型患者的血水平显著高于正常人,这可能是由于糖尿病时高血糖可促进的表达增加,且在系膜细胞中,高血糖还可促进回吸收正反响调节循环中的表达口而组之间无差异,的增加,那么说明血的水平不能反映型的损伤程度而各组间尿水平有显著性差异,组显著高于正常人,且随着病情的进展尿水平呈上升趋势是大分子物质.,循环中的不可能大量的通过肾小球滤过,说明尿中出现的主要是由肾脏分泌【引近端肾小管合成分泌的直接被分济南大学硕士学位论文泌入小管腔,而肾素和存在于整个肾单位中,过多的未被水解的便随尿排出,故本资料的尿水平的变化说明尿可能是反映型肾功能损害程度的指标在肾内,激活的主要是通过可改变肾脏的血流动力学,改变细胞表型、引起细胞增殖,调节多种生物活性物质血管活性激素等的基因表达,并激活成纤维细胞、内皮细胞、系膜细胞等多种细胞内的信号传导通路,引起肾脏的病理生理学改变近年来,临床资料显示血糖高的糖尿病患者的.的水平是降低的,可能与高血糖负反响调节抑制垂体生长因子对.合成的促进作用有关而本资料结果显示型患者的血清.水平显著高于正常人,且与血糖呈负相关,但随着病情的进展,血清.无显著性变化,这可能与高血糖直接或间接抑制.的合成与释放有关,且型糖尿病以胰岛素抵抗为主,不排除应用胰岛素对.的干预作用,除此之外,血.的变化也可能与大量蛋白尿时肾脏的排泄有关,但其具体的机制有待进一步探讨。
三组的尿水平之间有显著性差异,患者的尿.水平显著高于正常人,且随着病情的进展逐渐升高该结果提示时,早期肾脏肥大及肾小球系膜细胞增生等病理生理的变化,导致肾脏局部.自分泌或/和代偿性旁分泌合成增加,同时.降解减少,最终导致.排泄逐渐增加,且大量蛋白尿时,循环中的.可经肾脏露出,但.是大分子物质,不能在早期没有大量蛋白尿时经肾小球露出,因此早期尿.水平增加,可能与肾脏局部对.的调节有关,而临床期患者尿.水平的增加,可能是由肾脏局部的调节及经肾小球露出等多方面作用的结果,故.促进了的发生与开展,且尿.水平与病变程度相关可导致早期出现肾小.对肾脏可能起促进作用的机制可能有:球肥大、肾小球高滤过,从而改变肾脏的血流动力学研究发现【劭】,.可刺激系膜细胞增生,引起肾脏增大;在高血糖环境下,.可促进的产生而增加肾小球滤过率可促使纤维连接蛋白、脂质等细胞外基质在系膜高血糖可使肾小球系膜细区沉积,损伤系膜细胞,导致肾小球硬化【卜胞中的葡萄糖转运蛋白及糖摄取速度大幅度增加,.可促进细胞中葡萄糖的转运作用,增加系膜细胞对葡萄糖摄入,从而加剧基质成分的产生【,参与的发生与开展血管紧张素原与胰岛素生长因子.在糖尿病肾病进展中作用的研究本动物实验研究的大鼠不仅有多饮、多食、多尿、身体消瘦等病症,且./、/,说明本研究的大鼠模型制备是成功的。
在的不同时期,模型大鼠的血糖均处于高水平,小时尿蛋白明显高于同期正常对照组,且随着病情的进展肾脏病理组织观察可见肾小球体积先增大,后萎缩,并出现基质增生的变化,符合糖尿病肾脏病变的开展,同样检贝和.的变化趋势,探讨和.在的发生开展中的作用机制及其相互间的关系本实验的结果显示,不同时期的大鼠的血清水平均高于对照组,随着病情的进展未见明显变化;而尿水平均较对照组明显升高,且随着病情的进展逐渐增高;并且实验检测了大鼠肾脏组织的表达情况,发现早期的的表达较对照组明显增加,且随着病情的进展逐渐升高血液中的为大分子物质,不能大量的通过肾小球滤过,而肾脏局部产生的直接分泌到肾小管腔中后,在肾素、的作用下便生成,又可通过相应的受体介导回 。