双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握紫外、掌握紫外可见分光光度计的使用方法可见分光光度计的使用方法2 2、学习在紫外光谱区同时测定双组分体系、学习在紫外光谱区同时测定双组分体系 维生素维生素C C和维生素和维生素E E的方法双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 二、实验原理二、实验原理 维生素维生素C和维生素和维生素E在紫外光区具有不同的最大在紫外光区具有不同的最大吸收波长，维生素吸收波长，维生素C是水溶性的，维生素是水溶性的，维生素E是脂是脂溶性的，但它们都能溶于无水乙醇，可在同一溶性的，但它们都能溶于无水乙醇，可在同一溶液中利用双组分测定原理同时测定溶液中利用双组分测定原理同时测定双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 二、实验原理二、实验原理 朗伯朗伯-比耳定律应用于双组分体系，可得到下比耳定律应用于双组分体系，可得到下列联立方程式：列联立方程式：上下两个方程式分别为波长上下两个方程式分别为波长 1、波长、波长 2下总吸下总吸光度、与维生素光度、与维生素C浓度及维生浓度及维生E浓度的关系式。
浓度的关系式解上述方程即可求维生素解上述方程即可求维生素C浓度及维生浓度及维生E浓度浓度双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 三、三、仪仪器与器与试剂试剂 UNICO-2000紫紫外外可可见见分分光光光光度度计计及及相相应应的的配配套套软软件件，石石英英比比色色皿皿(1cm)，容容量量瓶瓶(25ml)，容容量量瓶瓶(10ml)，吸量管吸量管(10 ml)移液管移液管(1ml)维生素维生素C储备液（储备液（3.00 molL-1）维生素维生素E储备液储备液（4.52molL-1）双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 四、四、实验实验步步骤骤(一一)配置标准溶液配置标准溶液1、分别准确取维生素、分别准确取维生素C储备液储备液4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml于于4个个25ml容量瓶中，用无水容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀乙醇稀释至刻度，摇匀2、分别准确取维生素、分别准确取维生素E储备液储备液4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml于于4个个25ml容量瓶中，用无水容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。
乙醇稀释至刻度，摇匀双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 四、四、实验实验步步骤骤(二二)扫描吸收光谱扫描吸收光谱以无水乙醇为参比，取以无水乙醇为参比，取6.00ml的标准溶液，在的标准溶液，在200300nm范围扫描出维生素范围扫描出维生素C和维生素和维生素E的的吸收光谱，并确定吸收光谱，并确定 1和和 2，打印谱图打印谱图三三)建立工作曲线建立工作曲线以无水乙醇为参比，在波长以无水乙醇为参比，在波长 1和和 2处分别测定步处分别测定步骤骤1配制的配制的8个标准溶液的吸光度运用个标准溶液的吸光度运用UNICO-2000数据处理软件系统，分别建立并打印数据处理软件系统，分别建立并打印4条工条工作曲线双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 四、四、实验实验步步骤骤(四四)药物中维生素药物中维生素C和维生素和维生素E的测定的测定准准确确称称取取0.01500.0200g的的含含有有维维生生素素C（抗抗坏坏血血酸酸）和和维维生生素素E（生生育育酚酚）的的药药物物，溶溶于于无无水水乙乙醇醇中中，并并用用无无水水乙乙醇醇定定溶溶于于25ml容容量量瓶中。
瓶中用用1ml移液管吸取上述溶液于移液管吸取上述溶液于10ml容量瓶，用容量瓶，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀在波长无水乙醇稀释至刻度，摇匀在波长 1和和 2处处分别测定其吸光度分别测定其吸光度五五、操作要点和注意事项操作要点和注意事项 双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 1 1、正确使用参比溶液校正仪器正确使用参比溶液校正仪器2 2、每变换一次波长就需用参比溶液校正仪器每变换一次波长就需用参比溶液校正仪器双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 六六、数据处理数据处理 1、打印维生素、打印维生素C和维生素和维生素E的吸收光谱图，确定的吸收光谱图，确定 1 和和 22、分别打印维生素、分别打印维生素C和维生素和维生素E在在 1和和 2时的时的4条条 工作曲线，求出工作曲线，求出4条曲线的斜率条曲线的斜率 3、计算药物未知液中的维生素、计算药物未知液中的维生素C和维生素和维生素E的浓度双波长分光光度法同时测定药物中双波长分光光度法同时测定药物中维生素维生素C和维生素和维生素E 七七、思考题思考题 1 1、从维生素从维生素C和维生素和维生素E的结构式解释一个是的结构式解释一个是“水水 溶性溶性”，一个是，一个是“脂溶性脂溶性”的原因。
的原因2 2、使用本方法测定维生素使用本方法测定维生素C和维生素和维生素E是否灵敏？是否灵敏？解释其原因解释其原因。