1、 取材与固定:从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0. 5厘米)投入预先配好的固定液中(1 0%福尔马林,Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶 或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构Bouin氏液是常用的混合固定液配方:苦味酸饱和液(1.22 %) 75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml2、 脱水透明:一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份再将组织块置于既溶于 酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋3、 浸蜡包埋:将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温待石蜡完全浸入组织块后进行包 埋:先制备好容器(如折叠一小纸盒),倒入己溶化的石蜡,迅速夹取已浸透石蜡的组织块放 入其中冷却凝固成块即成包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片生 物秀实验频道)4、 切片与贴片:将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚切下的薄片往往皱折, 要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45°C恒温箱中烘干5、 脱蜡染色:常用HE染色,以增加组织细胞结构各部分的色彩差异,利于观察。
苏木精(Hematoxylin, H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有 嗜碱性伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色 的结构具有嗜酸性染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精, 最后入蒸馏水,就可染色HE染色过程是:① 将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟② 酸水及氨水中分色,各数秒钟③ 流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻④ 入70 %和90 %酒精中脱水各10分钟⑤ 入酒精伊红染色液染色2—3分钟6、 脱水透明:染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明7、 封固:将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就 可使用。