LOGO小分子小分子小分子小分子(fnz)(fnz)肝肝肝肝素的制备素的制备素的制备素的制备陈紫娟第一页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO目目 录录概述概述(i sh)1制备制备(zhbi)方法方法2酶活测定方法及分子量测定方法酶活测定方法及分子量测定方法3实验进度实验进度(jnd)及问题及问题4第二页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO1 1 概述概述(i sh)(i sh)v肝肝素素（Unfractionated heparin,UFH）作作为为抗抗凝凝剂剂和和抗抗血血栓栓药药在在临临床床上上使使用用已已有有60余余年年，但但长长期期(chngq)使使用用会会导导致致出出血血和和血小板减少等不良现象血小板减少等不良现象v低低分分子子肝肝素素(Low-molecular-weight heparin,LMWH)是是由由普普通通肝肝素素裂裂解解而而来来与与普普通通肝肝素素比比较较，其其抗抗血血栓栓能能力力较较强强而而抗抗凝凝血血能能力力较较低低，在在其其抗抗血血栓栓能能力力形形成成时时对对凝凝血血系系统统的的影影响响较较小小另另外外低低分分子子肝肝素素还还具具有有分分子子量量小小、生生物物利利用用度度高高、体体内内半半衰衰期期长长、出出血倾向小等特点，因此低分子肝素的制备具有重要的意义。
血倾向小等特点，因此低分子肝素的制备具有重要的意义第三页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO v根据其末端链的差异(chy)和制备方法的不同，低分子肝素主要分为八种平均分子量平均分子量制制备方法方法FXa/Fa的比例的比例末端末端链那屈肝素依诺肝素达肝素舍托肝素亭扎肝素瑞维肝素阿地肝素帕肝素45003500-50004000-60004500-80004900400060005000亚硝酸降解 乙醇分级苯甲化并碱降解亚硝酸降解 凝胶过滤亚硝酸异戊酯降解肝素酶降解亚硝酸降解过氧化氢降解过氧化氢降解3.63.82.04.21.95.01.92.02，5-脱水-D-甘露糖还原末端4，5-不饱和糖醛酸非还原末端2，5-脱水-D-甘露糖还原末端2，5-脱水-D-甘露糖还原末端4，5-不饱和糖醛酸非还原末端2，5-脱水-D-甘露糖还原末端不稳定的糖苷键不稳定的糖苷键第四页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO2 2 制备制备(zhbi)(zhbi)方法方法化学裂解法化学裂解法亚硝酸降解(jin ji)法、过氧化氢降解(jin ji)法、-消除降解法和其它化学降解法 制备制备(zhbi)方法方法物理分离法物理分离法有机溶剂分级沉淀法、凝胶色谱法、亲和色谱法、离子交换色谱法和超滤法（不适用与工业化生产）酶解法酶解法肝素酶第五页，共十三页。
小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGOv亚硝酸降解法亚硝酸降解法肝素钠肝素钠 溶液溶液 降解液降解液 中和液中和液 沉淀沉淀 低分子低分子(fnz)肝素肝素2.1 2.1 化学降解法化学降解法1%醋 酸(c sun)亚硝酸钠-530，3.5h氢氧化钠(qn yn hu n)中和无水乙醇丙酮脱水，干燥该解聚肝素的过程受温度、溶液该解聚肝素的过程受温度、溶液pH值、亚硝酸盐的浓度及降解时间的影响较大值、亚硝酸盐的浓度及降解时间的影响较大第六页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO2.1 2.1 化学降解法化学降解法v2.1.2 过氧化氢降解法过氧化氢降解法 肝素钠肝素钠 溶液溶液 溶液溶液 反应液反应液 浓缩液浓缩液 中和液中和液 沉淀沉淀 低分子肝素低分子肝素 该法制备该法制备LMWH 的过程也主要受反应的温度的过程也主要受反应的温度(wnd)、pH值和过氧化氢浓度的影响值和过氧化氢浓度的影响 乙酸钠PH 7.8 抗坏血酸、乙酸(y sun)铜水溶液PH 7.8边搅拌(jiobn)边加入过氧化氢PH 7.8，40，24h真空浓缩EDTA钠盐无水甲醇干燥第七页，共十三页。
小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO2.1 2.1 化学降解法化学降解法v2.1.3 -2.1.3 -消去降解法消去降解法 -消除降解法包括肝素季铵化和降解两步处理肝素的季铵盐和卤代烃或卤代苄基化合物在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中可以发生酯化反应,生成的肝素酯可在碱性条件下水解(shuji)成LMWH肝素解聚程度可由酯化率，碱性条件或酯的类型决定v其它化学降解法其它化学降解法v除亚硝酸降解、-消除降解法和过氧化氢降解这三种工业上用来制备LMWH的化学方法以外，还可采用高碘酸降解、次氯酸降解、-照射和硫酸一氯磺酸降解等几种方法制备LMWH这几种制备方法目前没有其投入工业化生产的报道第八页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO2.1 2.1 化学降解法化学降解法v优点：化学裂解法工艺简单，成本低廉，适宜工业化生产v缺点：化学裂解法在裂解过程中容易导致硫酸基丢失(dis)ATlll一结合部位减少，同时其在裂解过程中易引入有毒物污染环境第九页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO2.2 2.2 酶解法酶解法(ji f)(ji f)v肝素的酶法降解己经被用作分析肝素的结构和制备LMWH。
肝素酶是能特异性的裂解肝素和类肝素主链糖苷键的酶，最初是从肝素黄杆菌(gnjn)（Flavobacterium heparinum）中发现并分离后在一些其它的微生物和真核生物中也有发现，如拟杆菌属、棒杆菌属和芽孢杆菌属等几种，真核生物的霉菌、胎盘、胸腺、血小板等中均有发现v肝素酶主要用于低分子肝素生产和链上精确结构的研究，现在市场上肝素酶价格昂贵且都是肝素黄杆菌肝素酶，这是由于分离肝素酶稳定性差及产量不高所造成的第十页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGO2.2 2.2 酶解法酶解法(ji f)(ji f)微生物微生物微生物微生物微生物微生物方法方法方法方法方法方法构建高效表达且不易产生包涵体的基因工程菌基因工程基因工程基因工程基因工程基因工程基因工程方法方法方法方法方法方法相较化学裂解法，酶解法裂解环境温和、对环境无污染，但目前市场(shchng)上售卖肝素酶，价格昂贵，且均是肝素黄杆菌肝素酶为了降低肝素酶的价格，可尝试以下三条途径：筛选(shixun)新的高效产酶菌株生化生化方法方法进一步研究肝素酶的结构、性质，提高分离纯化效率第十一页，共十三页小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析LOGOAdd your company slogan第十二页，共十三页。
小分子肝素制备剖析小分子肝素制备剖析内容(nirng)总结小分子肝素的制备肝素（Unfractionated heparin,UFH）作为抗凝剂和抗血栓药在临床上使用已有60余年，但长期使用会导致出血和血小板减少等不良现象与普通肝素比较，其抗血栓能力较强而抗凝血能力较低，在其抗血栓能力形成时对凝血系统(xtng)的影响较小根据其末端链的差异和制备方法的不同，低分子肝素主要分为八种PH 7.8，40，24hThank You第十三页，共十三页小分子肝素制备剖析。