计胆C松ZOONBIO BjOTECHhlOLOGY原核蛋白（包涵体）表达案例技术服务咨询：025-85774B00 —i025-85454B00 「查号拨0,（分机）分子的碧蛋白和茁免疫806/檢测引1025-85^34B00 —产品销售专线：025-8444&440公副名称：南京钟鼎生物技术有限公司 技术支持热我:400-066-8086公司网址： 邮箱：order@ 锐号：91320116S6723852XA联系地址：江苏省南京经济开发区红枫科技园A6榇2楼钟鼎生物（邮编210033 ）原核蛋白(包涵体)表达案例■11. 实验目的以客户提供的目的蛋白基因构建表达载体，通过原核蛋白表达体系获得目的蛋白A2. 实验设计(1)分析客户提供的目的蛋白序列，设计蛋白表达方案；(2) 选择钟鼎特色载体pCznl,构建表达质粒pCznl-A；(3) IPTG诱导进行目的蛋白表达，并且优化表达条件，将诱导条件调整至37°C, 经分析目标蛋白主要呈包涵体形式，通过Western Blot检测蛋白A是否表达；(4) 通过Ni柱纯化获得目的蛋白A, SDS-PAGE检测纯化蛋白纯度，BSA方法 测定蛋白浓度。
3. 蛋白分析(1)经 EditSeq 翻译目的蛋白 A 序列：m.w.=23.25kd, pl=5.22( 2)经 UniProt 匹配，蛋白 A 物种来源：人类(3)蛋白性质分析蛋白亲疏水分析2FbsitionIphob. / Kyte brallttle蛋白跨膜结构域分析1 2o.ea.s0.4021DD2 DO蛋白信号肽预测1.0oa0.6z0.2OQG^core Ssccre ^?core RSCrr DLIS N KAFU F P KE EDT 5 WE LKA P L7 KPL UFT V 匚 I MFVT ELEETRDVS I FE VAT KROfl H E I LI FA*5102D306070PositionyiEtsureraaitionVB.1UB匚urcSf sigiial pepeide?MKr C514 201HE.X. T51D. 1£EMKr 3帖0.159ziea.n S1-EaD. LD2D1-500.1230+Q uroi'HZis-Sequencc E*~DuL25 D-cucari-^D . Mecworkj-5zgnaJ.f-n.aTH分析结果：目的蛋白整体呈亲水性、无跨膜结构域、无信号肽序列，可尝试全长表达。
结论：将目的基因构建在钟鼎特色载体 pCzn1 上，利用载体自带信号肽分泌表 达4. 表达载体构建4.1 pCzn1-A 质粒酶切验证基因名称：A (OD260/OD280:1.82) 酶切位点：Ndel /Xhol4.2 pCzn1-A 质粒测序验证：部分序列比对结果图WMMi二二曲亡•:盘miCCS二二TG二匚^I：TC«.S-r"AT5匚5. 蛋白表达及纯化KD M2 3 4116.066.245.035.025.018.414.4蛋白表达鉴定SDS-PAGE分析M:蛋白质分子质量标准1：未诱导2:诱导后3:诱导破碎后上清4:诱导破碎后沉淀蛋白纯化SDS-PAGE分析M:蛋白质分子质量标准1:破碎后处理样品2:流出3:洗脱蛋白Western Blot鉴定分析M:蛋白质分子质量标准1:纯化后样品6. 实验结论目的蛋白 A 在 IPTG 诱导下进行包涵体形式表达，蛋白表达成功。