葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易微板法)简介：葡糖-6-磷酸脱氢酶(glucose 6-phosphatedehydroge nase,G-6-PD 或 G6PD)是糖 酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径) 中的第一个酶(EC1.1.1.49)Leagene葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)检测试剂盒(简易比色法)其检测原理是红细胞 G-6-PD催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-内酯，后者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA)，同时 NAPD被还原成NADPH，其反应公式如下：G-6-P+NAPD+—6-PGA+L-NADPH在上述偶联反应中，NADPH生成速率与样本中酶活性呈正比，通过酶标仪或自动分 析仪在检测吸光度升高速率(AA/min),升高速率QA/min)与G-6-PD活性呈正，直接计算 酶的活性单位100T该试剂盒试剂可以检测50次样本，该试剂盒仅用于科研领域，不宜 用于临床诊断或其他用途组成：编号名称 -TE0O83100TStorage试剂(A):样本稀释液30ml-20°C避光试剂(B): G6PD assay buffer30ml4°C试剂(C): NADP9mg-20C试剂(D): G-6-P1支-20C试剂(E): G-6-P稀释液10mlRT使用说明书1份自备料：1、 生理盐水2、 水浴锅3、 96孔板4、 酶标仪操作步骤(仅供参考):1、准备溶血液：取新鲜抗凝血，离心取上清及白细胞层，用4弋预冷的生理盐水洗涤，每 次取上清时，务必去除剩余的白细胞层，再加预冷的生理盐水配成含红细胞压积为30% 的红细胞悬液,4^保存备用。
临用前，以样本稀释液稀释，即为溶血液4弋保存10h ,-20°C 保存 48h2、 酉己制NADP储存液：取NADP溶解于G6PD assay buffer，充分混匀，配制成NADP 储存液(9mg/ml), -20C保存备用3、 配制检测工作液取NADP储存液和G6PD assay buffer按NADP储存液(9mg/ml): G6PD assay buffer混合，即为检测工作液20°C保存，一个月有效4、 酉己制G-6-P工作液：取G-6-P 1支溶解于G-6-P稀释液，混匀，即为G-6-P工作液， 分装成小份后，-20C保存备用5、 分光光度计检测：按照下表设置空白管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避 免产生气泡如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定加入物空白管测定管检测工作液(p l)(37°C预温)220220G6PD assay buffer (p l)5一溶血液(p l)一5混匀，孵育G-6-P工作液(p l)2525混匀，37C孵育60s ,各管吸光度变化，计算各管△A/mi n6、生化分析仪检测：按照下表设置主要参数如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用 量或适当稀释后再进行测定。
波长340nm反应温度37C孵育时间90s连续监测时间60s比色杯光径1.0cm系数8040待测样品6p l检测工作液264p lG-6-P工作液33p l计算：分光光度计计算公式：G6PD(U/L)=AA/minx(10"6220)x(250/5)=4A/minx8040 式中：6220=NADH的吸光度250二反应液的总体积(p l)5二待测样品体积(p l)生化分析仪计算公式：G6PD(U/L)二AA/minx(10^6220)x(303/6)=AA/minx8040 式中：AA/mi n二测定的340nm吸光度的升高速率6220二NADH的吸光度303=反应液的总体积(p 1)6二待测样品体积(p l)参考范■:成年健康人红细胞G6PD : 8-18U/g Hb注意事项：1、 血清中G6PD活性在室温可以保存2天，4弋保存1周，-20^保存1个月2、 严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作有效期：6个月有效相关：编号名称CA0005氨苄青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml)DH0006苏木素伊红(HE)染色液NR0003Lezol(总RNA提取试剂)PE0018SDS-PAGE凝胶配制试剂盒TC0713葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。
