蛋白质一级结构的测定1 .测定蛋白质分子中多肽链的数目： N-末端和C-末端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量2 .拆分蛋白质分子的多肽链非共价相互作用缔合的寡聚蛋白：用变性剂尿素盐酸胍共价二硫桥：氧化剂或还原剂3 .断开多肽链内的二硫桥过甲酸氧化法常用试剂过甲酸巯基化合物还原法：过量的巯基乙醇处理， ph8-9 室温，系统中放尿素和盐酸胍，烷基化试剂保护常用试剂3疏基乙醇，疏基乙酸4 .分析每一多肽链的氨基酸组成：完全水解酸水解：常用hcl,水解后除去碱水解：用于测定色氨酸含量很多氨基酸遭到破坏，色氨酸定量回收5鉴定多肽链的 N-末端和C-末端N-末端分析：①二硝基氟苯DNFB②丹磺酰氯DNS ：强烈荧光，灵敏度高③苯异硫氟酸酯PITC：多肽或蛋白质的末端氨基和氨基酸的“氨基一样与PITC反应生成PTC-多肽，在酸性有机溶剂中加热，N-末端的PTC-氨基酸发生环化④氨肽酶：肽链外切酶/外肽酶，从多肽链的N-末端逐个向里切常用亮氨酸氨肽酶（水解以Leu为N-末端的肽链速度为最大）C-末端分析：①肿解法：蛋白质多肽与无水肿加热发生肿解反应中除C-末端氨基酸以游离形式存在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肿化物。
肿解中，Gln,Asn,Cys被破坏不易测出，C末端的 Arg 转变成鸟氨酸②还原法：硼氢化锂还原成a -氨基醇③竣肽酶法：肽链外切酶，专一地从肽链C末端逐个降解竣肽酶 A能释放除Pro,Arg和Lys之外的所有C-末端残基的肽键，B只能释放精氨酸和赖氨酸，AB的混合物能释放除 Pro 外任一 C 末端残基的肽键 Y 可以作用于任何一个C 末端残基6 .裂解多肽链成较小的片段：用几种不同的断裂方法将每条多肽样品降解成几套①酶裂解法：肽链内切酶胰蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，胃蛋白酶胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基的羧基参与形成的肽键胰凝乳蛋白酶能断裂赖氨酸、酪氨酸、甘氨酸残基的羧基参与形成的肽键②化学裂解法： 测定相对分子质量大的蛋白质序列 溴化氰： 断裂由 Met 残基的羧基参加形成的肽键 羟胺断裂 肽段的分离纯化7 .测定各肽段的氨基酸序列Edman 化学降解法： PITC 与多肽链的游离氨基作用， 测定任何非封闭的多肽蛋白质序列仪酶降解法：利用外肽酶（氨肽酶和羧肽酶）逐个向里切质谱法，气质联用法根据核苷酸序列的推定法8 .重建完整多肽链的一级结构9 .确定半胱氨酸残基之间形成的S-S交联桥的位置采用胃蛋白酶水解原来的含二硫桥的蛋白质， 所得的肽段混合物用对角线电泳进行分离，用茚三酮反应鉴定如有侵权请告知删除， 文档可自行编辑修改内容，供参考，感谢您的配合和支持）。