蛋白质浓度测定

蛋白质浓度测定姓名：张弛 学号：201100140157班级：生院2011级生物基地 时间：2013年3月18日实验目的熟悉并掌握福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度的原理及方法实验原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，能与Folin-酚试剂起氧化还原 反应，生成蓝色化合物，蓝色的深浅与蛋白质浓度成正比，可用比色法测定蛋白 质浓度实验仪器血清、分光分度计、试管、移液枪实验试剂标准酪蛋白200 m g/mL、Folin-酚乙液(原液：水=1:1 )、Folin-酚甲液［4%Na CO :_ 2 30.2Na0H=1:1 (A)、1%CuS0 : 2%酒石酸钾钠=1:1 (B), A： B=50:1，混匀］4实验步骤1、取9支干净试管，编号，按下表顺序加入试剂试剂 编号123456789标准 蛋白00.20.40.60.81.0000血清0000000.20.20.2水1.00.80.60.40.200.80.80.82、 每个试管分别加入Folin-酚甲液5mL，混匀，30°C水浴10min3、 每个试管分别加入Folin-酚乙液0.5mL，混匀，30C水浴30min4、 将上述试管在波长640nm下进行比色，测出吸光度。

5、 以前7支试管所测值，作标准曲线6、 以后三支试管吸光度值与标准曲线对比，求出100mL血清中蛋白质含量实验结果编号123456789吸光 度0.0000.0670.1280.1830.2870.3220.1740.1790.178吸光度0. 4悝0. 3汉0.2誉0. 100蛋白闖含量澀(11 g}ml) 40样品平均吸光度=0.177样品中蛋白质含量= X 6号试管蛋白质浓度 =0.177 X 30.776号试管吸光度 0.322= 16.91 仇 g/mL=0・001691 g/100mL实验讨论1、 在使用移液枪时，注意调节刻度；吸取液体时不可按到底，在打出液体时可 以按到底2、 实验组需要3支试管，分别测出其吸光度后取平均值，减小误差3、 每次加入Folin-酚试剂甲液和乙液后要在混合器上将液体充分混匀注意液 体不可加得过多，否则会在混匀时溅出试管若将混合器压得过紧也会使液体溅 出4、 加入Folin-酚试剂甲液和乙液后要水浴，目的是使液体充分反应5、 测量吸光度时要先预热分光仪每个比色杯装液体时必须用蒸馏水洗干净， 并用待测液体润洗比色杯只能触摸其糙面，光面不得手触摸，擦拭时要用擦镜 纸。

以1号试管，即蛋白质浓度为0的试管为参照，用它来调零；每次换液体浓 度时都不动1号试管，每次盖上盖后都用它调零测量时选择吸光度，用波长为 640nm的光来测量6、 绘制标准曲线以蛋白质浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，以直线尽可能穿 过最多的点通过标准曲线来计算所测血清中蛋白质浓度7、 计算时注意单位换算。