在舌鳞状细胞癌中的表达及其临床意义袁春平，李中武，张玮，王东苗，程杰，杨建荣，南京医科大学口腔医学研究所南京江苏 ，南京医科大学附属口腔医院口腔病理科南京江苏 基金项目：国家自然科学基金（），江苏省自然科学基金（），教育部高等学校博士学科点专项科研基金（）矚慫润厲钐瘗睞枥庑赖賃軔朧碍鳝绢作者简介：袁春平（），男，江苏盐城人，在读七年制研究生李中武 （），男，安徽六安人，在读硕士研究生共同第一作者通讯作者：杨建荣，主任医师 聞創沟燴鐺險爱氇谴净祸測樅锯鳗鲮 程杰，副教授 共同通讯作者残骛楼諍锩瀨濟溆塹籟婭骒東戇鳖納摘要目的：探讨蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的表达特点，及其与临床病理和患者生存预后的关系方法：应用免疫组织化学染色法检测蛋白在例舌癌组织标本和例正常舌黏膜组织标本中的表达结合患者临床病理资料和随访资料，应用软件分析的表达与相关临床病理参数（精确概率法）以及患者总生存率之间（法）的关系酽锕极額閉镇桧猪訣锥顧荭钯詢鳕驄结果：在部分舌鳞癌组织中呈高表达详细结果呈现，与正常粘膜结果相比，正常粘膜组标本不足（，），与其在正常舌黏膜组织的表达水平相比有显著统计学差异（<）。
蛋白表达水平与肿瘤大小表达水平还是强度？、颈淋巴结转移、临床分期有关相关性分析具有统计学差异？具有相关性（<），而与患者的性别、年龄、病理分级、局部浸润等无关有关无关不宜使用无相关性（＞） 法分析患者总体生存情况结果显示：高表达组患者的总体生存率明显低于低表达组患者（，检验）彈贸摄尔霁毙攬砖卤庑诒尔肤亿鳔简结论：在部分舌鳞状细胞癌组织中呈异常高表达，其表达水平与肿瘤发展的病理学特征及患者预后具有相关性有关具有相关性謀荞抟箧飆鐸怼类蒋薔點鉍杂篓鳐驱[关键词] 舌鳞状细胞癌；基因；有氧糖酵解；免疫组织化学染色 进一步修改英文摘要，特别是英文表述习惯厦礴恳蹒骈時盡继價骚卺癩龔长鳏檷 , , , , * *茕桢广鳓鯡选块网羈泪镀齐鈞摟鳎饗 Institute Stomatology, NanjingMedicalUniversity, Nanjing, , 鹅娅尽損鹌惨歷茏鴛賴縈诘聾諦鳍皑 , Hospital Stomatology, NanjingMedicalUniversity, Nanjing, , 籟丛妈羥为贍偾蛏练淨槠挞曉养鳌顿 : 預頌圣鉉儐歲龈讶骅籴買闥龅绌鳆現。
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烟酒是主要致病因素之一建议删，局部侵袭和淋巴转移是导致患者死亡的主要因素[]异常的肿瘤细胞代谢，主要是有氧糖酵解反应，是包括舌癌在内的恶性实体肿瘤包括舌癌在内的共同特性之一[]乳酸脱氢酶( , )是在肿瘤细胞糖酵解过程中催化丙酮酸生成乳酸的关键酶[]既往有少量研究表明：同工酶（）在多种恶性肿瘤组织中呈异常高表达，而且与肿瘤的多种恶性表征及患者的预后有密切相关[]然而，目前对于在舌癌发生发展过程中的生物学作用研究较少本研究旨在检测在临床舌癌组织中的表达，探讨其表达水平与患者的临床病理参数及预后的关系下文参照引言意见，仔细修订语言的规范和严谨相关性買鲷鴯譖昙膚遙闫撷凄届嬌擻歿鲶锖材料和方法舌癌临床组织标本选择年月至年月就诊于南京医科大学附属口腔医院口腔颌面外科的例舌鳞状细胞癌石蜡组织标本，其中男性例，女性例，平均年龄岁（岁）纳入标准：术前未接受放、化疗的原发舌癌患者，所有患者均采用原发病灶扩大切除术和颈淋巴清扫术（肩胛舌骨上颈淋巴清扫或全颈清），原发病灶经术后常规病理均证实为舌鳞状细胞癌患者的临床分期、病理分级等根据 分期标准和病理学分级标准确定所有患者均接受术后常规随访，资料齐全，平均随访个月（个月，从术后至最后一次随访时间点或患者死亡）。
例正常舌黏膜舌组织标本取自舌部非肿瘤手术，术后经常规病理检查确认为正常舌黏膜所有标本均经常规处理，置于中性甲醛液中固定，逐级脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋綾镝鯛駕櫬鹕踪韦辚糴飙钪麦蹣鲵殘 免疫组织化学染色试剂：羊抗人多克隆抗体（，公司），辣根过氧化物酶标记的兔抗羊二抗（北京中杉金桥生物技术有限公司），抗羊免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）驅踬髏彦浃绥譎饴憂锦諑琼针咙鲲鏵免疫组织化学染色步骤：所有石蜡组织标本切片（μ）后，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，经过氧化氢封闭灭活内源性过氧化物酶后，应用0.01M柠檬酸钠缓冲液行微波抗原修复（ ）, 经山羊血清封闭后滴加一抗（）℃，过夜次日分别滴加兔抗山羊二抗、室温，充分洗涤后显色苏木素复染后，脱水透明，封片镜检用缓冲液代替一抗做空白阴性对照猫虿驢绘燈鮒诛髅貺庑献鵬缩职鲱样阳性判定标准：免疫组化阳性信号以胞浆出现棕黄色染色为阳性细胞每张染色切片均由口腔病理科医师进行评价染色结果评价采用半定量积分法判断，即基于染色强度和阳性分布细胞比例计分判定[]染色强度定义为：阴性；弱阳性；阳性；强阳性阳性染色的细胞比例（百分比）通过镜下随机选择个高倍镜视野的个肿瘤细胞，定义为：＜；：；：；：＞。
免疫染色积分按“免疫组化积分染色强度×阳性”比例公式计算得出，分为阴性，分为弱阳性，＞为强阳性锹籁饗迳琐筆襖鸥娅薔嗚訝摈馍鲰钵统计学分析应用 进行数据的统计学分析，并采用卡方、精确概率法检验对表达水平与患者的临床病理因素进行相关性分析，同时应用法（检验）分析患者的生存情况構氽頑黉碩饨荠龈话骛門戲鷯瀏鲮晝结果在正常舌黏膜和舌鳞癌组织中的表达为了完整性建议提供阴性表达照片虽然用了精确统计，但为了说明在舌癌发生发展中的作用，建议增加对照样本輒峄陽檉簖疖網儂號泶蛴镧釃邊鲫釓免疫组织化学染色显示蛋白主要表达于胞浆中，胞核染色罕见舌癌组织标本中主要在鳞癌上皮中表达，癌周围组织表达很弱（图、）；正常舌黏膜组织中大多在上皮层可见散在低表达或不表达（图）根据我们免疫组化染色评价标准，例鳞癌中有例（）高表达，例（）呈低表达；在正常粘膜组织中例（）呈低表达，例表达呈阴性，例表达呈高表达 因此，在舌癌组织和正常舌粘膜组织的差异表达具有统计学意义（<）尧侧閆繭絳闕绚勵蜆贅瀝纰縭垦鲩换图在正常舌黏膜和舌鳞癌组织中的表达：正常舌黏膜上皮（×）：舌鳞癌组织标本低表达、弱阳性（×）：舌鳞癌组织标本高表达、强阳性（×） 识饒鎂錕缢灩筧嚌俨淒侬减攙苏鲨运。
Normal (×): (×): (×)表达水平与患者临床病理参数的相关性在例舌癌患者中结合临床病理资料发现：表达与肿瘤大小、颈淋巴结转移和临床分期有关具有相关性，而与患者的性别、年龄、局部浸润性和病理分级均无相关性关（详见表）凍鈹鋨劳臘锴痫婦胫籴铍賄鹗骥鲧戲表舌鳞癌组织中的表达水平与临床病理参数的关系 恥諤銪灭萦欢煬鞏鹜錦聰櫻郐燈鲦軫临床病理参数病例数值低表达高表达性别男性女性年龄≤＞肿瘤大小病理分级ⅠⅡⅢ颈淋巴结转移()()局部浸润无有临床分期ⅠⅡⅢⅣ表达与患者总体生存率的关系结合临床随访资料，应用 法对患者的总体生存情况进行分析如图所示，高表达组患者的总体生存率明显低于低表达组（，检验）鯊腎鑰诎褳鉀沩懼統庫摇饬缗釷鲤怃图的表达与患者总体生存率的关系（分析） 硕癘鄴颃诌攆檸攜驤蔹鸶胶据实鲣赢讨论进一步结合研究结果深入讨论意义，以及今后的进一步研究思路恶性肿瘤细胞在有氧条件下进行糖酵解反应，即 , 是癌细胞基本生物学特性之一[]癌细胞为满足生长增殖需要，在有氧环境中通过糖酵解以获得更多的营养和能量在此过程中，葡萄糖进过系列生物化学反应生成丙酮酸，然后大多丙酮酸通过乳酸脱氢酶反应形成乳酸。
因此，乳酸脱氢酶是癌细胞有氧糖酵解过程中的关键酶之一，也是潜在的癌基因，在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用[]既往研究表明：在多种原发性恶性肿瘤包括大肠癌、肺癌、头颈癌等组织中呈中异常高表达[]本研究通过对正常舌黏膜和舌癌组织标本的免疫组织化学染色发现，与其他恶性实体肿瘤类似，蛋白在多数舌癌组织中呈高表达，阳性表达率明显高于正常舌粘膜组织；染色主要是位于肿瘤细胞的胞浆中，而在胞核中罕见，这也与的生物学功能相符合这提示可能参与了舌癌的发生发展过程作为一种癌基因，可能是参与了舌癌发生发展过程中的重要分子阌擻輳嬪諫迁择楨秘騖輛埙鵜蔹鲢幟既往研究已证实：蛋白的异常高表达与多种恶性肿瘤的多种临床病理参数具有相关性有关 等对例头颈鳞癌标本进行免疫组织化学染色，结果发现在头颈癌中高表达，与肿瘤的大小、α、局部复发和远处转移有关，并且提示可能是逆转放疗抵抗和潜在的治疗靶点[]在例口腔鳞癌标本中对进行免疫组化监测，发现其高表达与颈淋巴结转移、肿瘤临床分期和局部复发相关[]在手术对例大肠腺癌手术标本中的表达进行免疫组织化学检测，结果发现的异常高表达与α的表达呈正相关，而且其高表达预示着患者的预后不良[]与此类似，我们的研究结果也证实：在人舌癌组织中蛋白的表达水平与肿瘤大小、颈淋巴转移和临床分期呈显著相关。
再结合组织标本中的表达和患者的生存预后情况，我们发现的表达与舌癌患者的总体生存率有关，即：高表达患者总体生存率明显低于低表达患者因此，我们认为在舌癌组织中的表达水平可是判断患者总体生存的重要指标之一氬嚕躑竄贸恳彈瀘颔澩纷釓鄧鳌鲡貼综上所述，本研究发现蛋白的表达水平与与肿瘤大小、颈淋巴转移和临床分期和患者的总体生存率显著相关，是舌癌潜在的分子标记物之一，综上所述，本研究发现蛋白是舌癌发展过程中的重要癌基因，其表达与与肿瘤大小、颈淋巴转移和临床分期和患者的总体生存率显著相关，是舌癌潜在的分子标记物之一，也提示可能是潜在的抗肿瘤生物治疗的靶点然而，在舌癌病变过程中的生物学机制及以为靶向的生物治疗新手段值得进一步深入研究釷鹆資贏車贖孙滅獅赘慶獷緞瑋鲟将参考文献： , , . : . , , ().怂阐譜鯪迳導嘯畫長凉馴鸨撟鉍鲞谣 , : , , ().谚辞調担鈧谄动禪泻類谨觋鸾帧鲜奧 , , , ().嘰觐詿缧铴嗫偽純铪锩癱恳迹见鲛請 , , . : , , ().熒绐譏钲鏌觶鷹緇機库圆鍰缄鹗鲚圆。
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