去壁低渗法制备去壁低渗法制备 植物染色体标本植物染色体标本实验目的n掌握植物染色体标本制备的去壁低渗方法掌握植物染色体标本制备的去壁低渗方法n了解中期染色体的形态结构了解中期染色体的形态结构实验原理 植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体很难像动物染色体那样平整地贴在载玻很难像动物染色体那样平整地贴在载玻片上，可通过纤维素酶和果胶酶处理去片上，可通过纤维素酶和果胶酶处理去掉细胞壁；用低渗溶液处理可以提高染掉细胞壁；用低渗溶液处理可以提高染色体的分散程度陈瑞阳等（色体的分散程度陈瑞阳等（19791979，19821982）提出了植物染色体标本制备的酶）提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗法，并在多种植物上得到广解去壁低渗法，并在多种植物上得到广泛应用，成为当前植物染色体研究中的泛应用，成为当前植物染色体研究中的重要方法重要方法实验用品1.材料材料 大麦或玉米种子2.用具用具 显微镜；温箱；冰箱；重蒸水；眼科镊子；刀片；牙签；载玻片；试剂瓶；三角瓶；量筒；酒精灯；青霉素小瓶3.药品药品 0.2%秋水仙素溶液；磷酸缓冲液pH7.6；3-5%Giemsa染色液；0.075mol/L氯化钾；混合酶液：称取纤维素酶，果胶酶各0.5g,加入20ml蒸馏水即为2.5%混合酶液,冰箱内冰冻保存；卡诺固定液实验步骤1 1、材料培养：将玉米或大麦的种子充分后，摆在铺有滤纸的培养皿、材料培养：将玉米或大麦的种子充分后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在内，在2525温箱发芽培养温箱发芽培养2 2、预处理：待根长至、预处理：待根长至0.5-10.5-1cmcm时时,切取根尖立即放入盛有切取根尖立即放入盛有1 1ml0.2%ml0.2%秋秋水仙素的小瓶中预处理水仙素的小瓶中预处理2-32-3小时小时3 3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1 1mmmm），），放入放入0.0750.075mol/Lmol/L氯氯化钾低渗液中，在化钾低渗液中，在2525条件下处理条件下处理3030分钟。
以下可分两种方法分钟以下可分两种方法进行处理进行处理4 4、经过上述两种方法处理的材料、经过上述两种方法处理的材料,可用两种方法制备染色体标本可用两种方法制备染色体标本1 1）第一种方法）第一种方法,涂片法涂片法:（1 1）固定：将后低渗好的材料，直接用甲醇：冰醋酸（）固定：将后低渗好的材料，直接用甲醇：冰醋酸（3 3：1 1）固定液固定固定液固定3030分钟以上分钟以上n（2 2）涂片：将材料放在预先用蒸馏水浸泡并冷冻的清洁载玻片）涂片：将材料放在预先用蒸馏水浸泡并冷冻的清洁载玻片上，加上，加1 1滴固定液，然后用镊子迅速将材料夹碎涂布，并去掉大滴固定液，然后用镊子迅速将材料夹碎涂布，并去掉大块组织残渣块组织残渣 （3 3）火焰干燥：立即将载玻片在酒精灯火焰上微微加热烤干）火焰干燥：立即将载玻片在酒精灯火焰上微微加热烤干实验步骤2 2）第二种方法，悬液法：）第二种方法，悬液法：（1 1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液悬液（2 2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3 3：1 1）固定液）固定液1-1-2 2mlml，使成细胞悬液使成细胞悬液（3 3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。
一个小瓶中4 4）去上清夜：将上层细胞悬液静置）去上清夜：将上层细胞悬液静置3030分钟左右，即可见细胞沉淀，分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.50.5mlml左右细胞悬液置备标本左右细胞悬液置备标本(5)(5)标本制备标本制备:在一张经过充分洗净脱脂在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片上清洁载玻片上,用吸管滴用吸管滴2-32-3滴细胞悬液滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干5 5、经干燥的玻片标本，用经干燥的玻片标本，用GiemsaGiemsa染色液染色染色液染色3030分钟，然后用自来水分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥细流冲洗，甩干水珠空气干燥6 6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体作业作业n中期染色体具有哪些形态特征？中期染色体具有哪些形态特征？n绘制一完整细胞并带有随体的中期染色绘制一完整细胞并带有随体的中期染色体图体图。