肺炎支原体IgM抗体检测SOP一、检验目的规范实验室人员操作，以保证实验结果的准确性二、预期用途该产品用于定性检测血清、血浆或全血中的肺炎支原体IgM抗体是引起社区获得性 呼吸道感染的主要病原体之一，可以导致支气管炎和非典型性肺炎主要引起人非典型肺炎、 气管炎及支气管炎，多经口和呼吸道等途径传播，多发于儿童和青年人MP感染已占小儿 呼吸道疾病30%以上，且有增加趋势人体感染肺炎支原体后，能产生特异性IgM和IgG抗 体IgM抗体出现早，一般在感染后1周出现，3~4周达高峰，以后逐渐降低再次感染 或重复感染后，常在1-2周内出现较高水平的IgG抗体MP肺炎与一般呼吸道感染和肺炎 的临床症状没有明显区别，MP感染早期诊断有利于MP肺炎的治疗血青学诊断法是临床 常用的主要诊断方法之一，灵敏度和特异性适中，常用的主要有酶联免疫吸附试验和凝集试 验三、 检验原理本产品以胶体金作为指示标记，用胶体金标记抗人IgM单抗，以基因工程技术表达肺 炎支原体P1蛋白抗原标被硝酸纤维素膜，应用“间接法”免疫层析技术原理，检测的肺炎 支原体感染病人血清、血浆或全血中的肺炎支原体抗体IgM，在检测过程中，若样本中存在 肺炎支原体抗体gM,则肺炎支原体抗体1gM与样本吸附垫中的胶体金一抗人IgM单抗结合 物形成复合物，复合物沿硝酸纤维素膜移动到检测区，与检测线上包被的肺炎支原体P1蛋 白抗原结合，多余的未被结合的结合物继续移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG 抗体结合，反应膜上出现1条红色的检测线和1条红色的质控线；若样本中不存在肺炎支原 体抗体IgM,则胶体金一抗人IgM单抗结合物直接沿硝酸纤维素膜移动到质控区，与质控线 上包被的羊抗鼠IgG抗体结合，仅形成一条红色的质控线。
四、 主要组成成份1、试剂盒组分包括肺炎支原体1gM抗体检测卡，样品稀释液1.1、检测卡主要组分：包括金标垫和硝酸纤维素检测膜，金标垫内包被有胶体金标记 的抗人IgM单克隆抗体;硝酸纤维素检测膜的检测线上包被有基因工程技术表达的肺炎支原 体P1蛋白抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体1.2、样品稀释液主要成分：PBS缓冲液2、每盒产品内含肺炎支原体1 gM抗体检测卡，共25人份，单人份/袋均加干燥剂单独 密封包装；样品稀释液1瓶，7mL/瓶：同种产品不同批号试剂盒的稀释液在有效期内可互换使用五、 储存条件及有效期产品储存应在4°C~30°C条件下，通风、避光、干燥处，禁止冷冻；有效期18个月 生产日期和有效期见标签六、 样本要求1、 本试剂盒仅适用于血清、血浆或全血样本2、 血浆样本适用的抗凝剂为肝素或EDTA.3、 样本应收集于洁净、干燥的容器中4、 严重溶血的样本必须重新采集血样5、 样本收集后应尽可能马上使用，不能在室温下长时间存放，血清、血浆或全血样本 可在2-8C冷范存放7天，血清或血浆长期保存需冷冻于-20摄氏度，冷藏或冷冻样本应在 检测前恢复到室温并充分混匀，样本切忌反复冻使用。
七、 检测方法1、 样本收集血清血浆或者全血做检测样本，可直接使用，若收集临床分离新鲜血清做检测样本，分离新 鲜血清样本要在1h内完成检测，超过1h需2-8C保存，2-8C保存时间不超过7天2、 检测方法将包装袋沿缺口处撕开，取出检测卡，平放，在检测卡右端的加样孔中加10nL的样本，再 加100uL样品稀释液，3-5分钟后可观察检测卡中部金视窗的结果，20分钟内判读结果有效八、 检验结果的解释阳性：在观察窗C、T处各出现一条红色线阴性：仅在观察窗C处出现一条红色线无效：在观察窗C处无红色线出现，表明试验失败或试剂失效在任何情况下，应重新 检测，如果问题仍然存在，应停止使用该批号产品，并与当地供应商联系九、检验方法的局限性1、本检测卡仅适用于新鲜血清、血浆或全血样本2、 由于受试剂盒检测最低检出量的限制，如样本中抗体浓度过低，可能得出不正确的 阴性结果3、 肺炎支原体1gM抗体检测试剂盒（胶体金法）只能定性检测肺炎支原体抗体IgM的存 在，不能确定样本中抗体的具体含量4、 本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床管理 应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查（尤其是病原学检测）、治疗反应及流行病学等 信息综合考虑。
5、 感染初期，肺炎支原体1 gM抗体未产生或滴度很低会导致阴性结果，如怀疑有病原 体感染，应提示患者在7-14天内复查，抽取第二份样本，并和第一份样本在同条件下同时 检测，以确定是否有初次感染的血清转化或肺炎支原体IgG抗体滴度4倍升高6、 由于孕妇的实验室检查不能可靠地鉴定胎儿患病的风险，故不建议采用本试剂对无 症状的母体感染进行筛查，不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据7、 免疫功能受损或接受免疫抑制治疗治疗的患者，如人类免疫缺陷病毒OIV）感染者 或器官移植后接受免疫抑制治疗的患者，其血清IgM抗体检测的参考值有限，可能会导致错 误的医学解释8、 在近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应 慎重9、 肺炎支原体IgM抗体不仅出现于初次感染，当二次感染和复发感染时也可能出现10、 当疾病的流行程度降低时阳性预测值降低，对低危人群阳性结果的解释应当谨慎， 本试剂对适用人群的性别、年龄及地域特征没有特殊要求十、产品性能指标1、 符合率：同批号的试剂盒检测10份符合率阳性参考品及10份符合率阴性参考品， 阳性符合率及阴性符合率均不低于100%.2、 精密度：企业中强阳性、弱阳性参考品检测结果均为阳性，显色均一，企业阴性参 考品检测结果均为阴性。
3、 最低检出量：同批号的试剂盒检查1:8倍稀释的最低检出量阳性参考品，检测结果 为阳性，显色均一4、 交叉反应：未发现本品与腺病毒IgM抗体、肺炎衣原体IgM抗体、柯萨奇B病毒IgM 抗体、呼吸道合胞病毒IgM抗体、弓形虫IgM抗体、乙型肝炎核心抗体、丙型肝炎抗体和巨 细胞病毒IgM抗体阳性血清有交叉反应5、 干扰试验：血红蛋白浓度为4g/L的溶血、甘油三酯浓度为5mmol/L的脂血、胆红素 浓度为140umol/L的黄疸、类风湿因子浓度为200IU/mL的类风湿、浓度为26g/L的高浓度 非特异性IgG抗体、浓度为11g/L的高浓度非特异性IgM抗体，或低于上述浓度，对检测结 果无干扰本试剂盒不受抗核抗体、抗线粒体抗体的干扰6、 HO0K效应：阳性血清1:8倍稀释后检测为阳性，原倍血清检测亦为阳性，未出现钩 状效应7、 IgM类类风湿因子和高效价肺炎支原体IgG抗体不对本品的检测产生干扰8、 药物干扰：左氧氟沙星不对本品检测产生影响十一、注意事项1、 本品如在冰箱中储存，取出后应充分复温(至室温)再打开包装使用2、 使用前不能浸湿测试板或触摸反应膜3、 包装袋内有干燥剂，不得内服4、 产品为一次性使用，仅用于体外诊断，用过的检测卡以及采样、加排过程中使用的 一次性器皿应按处理医疗垃圾的相关规定进行处理。
5、 如出现阴性结果，但症状仍然存在者应采用其他诊断方法6、 检验一旦开始操作，应按操作步骤连线进行，直至结束7、 试剂盒应贮存在4°C-30°C通风、干爆处，禁止冷冻十二、参考文献1 、 Eaton MD,Meiklejohn G et al. Studies on the Etiology of Pr imary Atypical Pneumonia A Filterable Agent Transmissible toCotton Rats, Hamsters, and Chick Embryos [U]. J Exp Med 1944,79 (6): 649-668.2、 Chanock RM. Mycop l asma pneumoniae: proposed nomenc laturelfor atypical pneumonia or gani sm (Eaton agent) [J]. Science 1963. 140 (3567) : 6623、 中华医学会儿科学分会呼吸学组，儿童社区获得性肺炎管理指南(试行)(上)[S]. 中华儿科杂志，2007. 45 (2) 84.4、 李双玉.IRS-PCR诊断肺炎支原体肺炎的临床应用与评价[D]天津医科大学。
2013.5、 胡大康，张谨，刘池波，杨敏，李向阳，荧光PCR法半定量肺炎支原体的研究[J].中国卫生检验杂志， 2009, 04: 755-760.6、 孙炜，赵勇，四种抗肺炎支原体抗体检测方法应用比较[J].医学检验与临 床， 2007, 05:34-35.精品文档。