荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用与结果分析【摘要】目的：分析荧光定量PCR对痰结核分枝杆菌的检测效率方法：对 2017.9〜2019.9期间我院接收的156例结核病患者为研究对象，收集其痰标本， 分别应用荧光定量PCR检测、改良罗氏培养法、涂片染色法检测结核分枝杆菌， 对三种方法的检测结果进行比对分析结果：与改良罗氏培养方法、涂片染色法 相比，荧光定量PCR检测方法阳性检出率提升明显，检测结果差异有统计学意义 （P<0.05）结论：荧光定量PCR对痰结核分枝杆菌具有较高的灵敏度，可提升 检出率关键词】荧光定量PCR；结核分枝杆菌；DNA；改良罗氏培养；涂片染色法Application and result analysis of fluorescence quantitative PCR in detection of Mycobacterium tuberculosis DNALiu Jing, Wang Furui, reference Office of the Fourth People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Yinchuan City, Ningxia, 750021[Abstract] Objective: to analyze the detection efficiency of fluorescence quantitative PCR for Mycobacterium tuberculosis. Methods: 156 TB patients from September 2017 to September 2019 in our hospital were studied. Sputum samples were collected and detected by fluorescence quantitative PCR, modified Roche culture and smear staining respectively. The results of the three methods were compared and analyzed. Results: compared with the improved Roche culture method and smear staining method, the positive detection rate of FQPCR was significantly increased, and the difference was statisticallysignificant (P < 0.05). Conclusion: fluorescence quantitative PCR has high sensitivity to Mycobacterium tuberculosis and can improve the detection rate.[Key words] fluorescence quantitative PCR; Mycobacterium tuberculosis; DNA; modified Roche culture; smear staining结核病在临床上作为一种常见的慢性传染性疾病，致病菌为结核分枝杆菌， 通过呼吸道飞沫（含菌）传播，对人类健康造成极大的威胁。
对结核病人痰结核 分枝杆菌进行检测，可对诊断提供依据，同时为治疗方案的制定奠定基础检测 方法的检测效果直接影响诊断准确性，本研究对我院接收的156例结核病患者为 研究对象，发现荧光定量PCR检测方法较传统检测方法较大的提升了阳性检出率， 可达到满意的效果，分析结果作如下报道1资料与方法1.1.一般资料选择2017.9~2019.9期间我院接收的结核病患者156例，包含98例男性患 者和58例女性患者，平均年龄为（50.06±2.15）岁（18~80岁）156例患者 的临床表现主要为呼吸道感染、盗汗、低热等所有患者均对本研究知情，并对 知情同意书进行签订1.1.方法收集患者清晨痰标本，生理盐水3次漱口，放弃患者第一口痰液，收集3口 深部痰液，分别装入无菌标本盒中，送检，护士指导留痰，避免唾液痰H】应 用荧光定量基因扩增仪对痰标本进行痰结核杆菌DNA检测，利用计算机对检测结 果进行分析，对标准曲线进行建立；并分别实施改良罗氏培养方法、涂片染色法对痰结核杆菌DNA进行检测，三种检测方法均以操作标准和说明书为依据，进行 规范化操作【2】1.1.数据分析比较3种检测方法的结核分枝杆菌阳性检出率数据处理分析选择统计学软 件SPSS23.0，计数数据和计量数据验证分别实施X2和t检验，P<0.05为差异有 统计学意义。
2结果比对3种检测方法的检出率，156例患者中，实施荧光定量PCR检测方法， 检出结核分枝杆菌146例，检出率为93.59% ；实施改良罗氏培养方法，检测出结 核分枝杆菌的例数为124例，检出率为79.49%；实施涂片染色方法，检测出结核 分枝杆菌的例数为82例，检出率为52.56%与改良罗氏培养方法相比，荧光定 量PCR检测法的检出率均得以提升明显，与统计学意义的评价标准相符（X2=13.3164，P<0.05）；与涂片染色检测法相比，荧光定量PCR检测法的检出 率均得以提升明显，与统计学意义的评价标准相符（X2=66.7268, P<0.05）；与 涂片染色检测法相比，改良罗氏培养检测法检出率均得以提升明显，与统计学意 义的评价标准相符（X2=25.2046，P<0.05）可见，与改良罗氏培养检测法、涂 片染色检测法相比，荧光定量PCR检测法阳性检出率有明显提高，检测效果更佳3讨论结核病作为一种传染性疾病，对人类健康造成严重的威胁，然而早期诊断， 并保证用药合理的情况下，结核病治愈性较高结核病致病菌为结核分枝杆菌， 传播途径为呼吸道飞沫传播，结核分枝杆菌存在于痰液中，对痰液进行检查，对 结核分枝杆菌进行及时发现，以便及时干预治疗，对患者预后进行改善，其中检 测方法极为关键。
结核杆菌在临床检测中有很多检测方法，主要包括荧光定量 PCR检测法、结核杆菌培养法和涂片染色法等，其中涂片染色法操作简单，且没 有较高的技术要求，然而其准确性却有待商榷，无法为诊断提供可靠的信息，也 无法为治疗方案的制定提供有效的信息，此检测方法仅应用于基层普查检测中 【3】与涂片染色法相比，细菌培养法对结核杆菌进行检测，具有较高的阳性检 出率，然而需要较长的时间，一般需要6~8周，同时非结核分枝杆菌也能成长， 结核分枝杆菌需要鉴定菌种来判断，存在局限性【4】荧光定量PCR检测方法对 结核分枝杆菌进行检测优势较为明显，操作简便，可快速进行诊断，有较高的灵 敏度，且检测结果可靠，具有较高自动化程度和特异度，计算机分析结果，尤其 是针对生长缓慢和无法培养的痰结核杆菌，检测优势更为明显，检测时间只需 2~3h，定量结果可对临床用药进行指导，因此可以作为诊断和治疗方案制定的依 据本研究结果显示，与改良罗氏培养检测法和涂片染色检测法相比，荧光定量 PCR检测方法的检出率(93.59%)均提升明显，可见，在痰结核杆菌检测中利用 荧光定量PCR检测方法可获得准确的检测结果，其应用价值较高，可实现定量检 测和定性检测，以此通过感染结核杆菌数量，对结核患者病情进行判断，为治疗 方案的制定提供依据。
本研究与李良杰等研究中荧光PCR技术检测方法的实施效 果基本一致【5】综上所述，荧光定量PCR对痰结核杆菌DNA进行检测具有较高的灵敏度，可 提升检出率和阳性检出率，适合在结核杆菌DNA检测中推广参考文献：[1] 宋华峰，赵静，胥萍.荧光定量PCR在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用价 值[J].中国热带医学,2019,19(11):1022-1025.[2] 张学志，林百丰,裴新发，陈丽，彭英，唐鹭.发光二极管荧光显微镜在基层 实验室检测分枝杆菌的价值[J].结核病与肺部健康杂志,2019,8(01):38-41.[3] 周稳兰，陆春芬,朱蔚岗，李军，卢应梅，尹建红,花兴萍.荧光定量PCR检测 技术在肺结核诊断中的应用[J].江苏医药,2015,41(23):2874-2875.[4] 王晓艳，王云超，王珍，李辉，马晓光.探针熔解曲线法检测痰结核杆菌耐异 烟肼突变[J].中国医学工程,2015,23(11):68-69.[5] 李良杰，林小玲.荧光PCR技术检测痰液中结核分枝杆菌的研究[J].中国 卫生检验杂志,2015,25(21):3636-3637.。