纤维素酶活性测定一、 试剂：1） 醋酸缓冲液（pH 5.5）： 164.08 g无水醋酸钠（C2H3O2Na）溶于700 ml去离子水，用醋 酸（C2H4O2）调节pH至5.5，用去离子水稀释至1 L2） CMC溶液（0.7%, w:v）： 7 g羧甲基纤维素钠盐溶于1 L醋酸缓冲液，45°C下搅拌2 h, 此溶液在4C下可存放7天3） 还原糖试剂：试剂A： 16 g无水碳酸钠（Na2CO3）和0.9 g氰化钾（KCN）溶于去离子水并稀释至1 L 试剂B： 0.5 g六氰铁钾（K4Fe （CN） 6）溶于去离子水并稀释至1 L,贮于棕色瓶中试剂 C： 1.5 g 硫酸铁铵（NH4SO4Fe2（SO4）2・H2O）、1 g 十二烷基硫酸钠（C12H25O4SNa）和 4.2 ml浓硫酸溶于50C去离子水，冷却后稀释至1 L4） 水合葡萄糖溶液：28 mg水合葡萄糖溶于少量去离子水中，并定容至1 L二、 仪器设备恒温培养箱，水浴锅，分光光度计，搅拌器，三角瓶三、 操作步骤取10.00 g （耕地）或5.00 g （林地）新鲜土壤（V2 mm）于100 ml三角瓶中，加15 ml 醋酸缓冲液和15 ml CMC溶液，盖上塞子，于50C下培养24 h，过滤。
同时做空白对照， 但在培养结束时才加入15 ml CMC溶液，并迅速过滤取2.00 ml滤液于50 ml容量瓶中，并用去离子水定容至刻度吸取2.00 ml稀释液于 20 ml试管中，加2.00 ml还原糖试剂A和2.00 ml还原糖试剂B，盖紧混匀，在100C水浴 中加热15 min后，立即至于20C水中冷却5 min加10.00 ml还原糖试剂C，混匀，20C 下静置显色60 min，于690 nm波长处比色测定（要求在30 min内完成）标准曲线：吸取 0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0 ml 水合葡萄糖溶 液，用去离子水稀释至2 ml，同上加入还原糖试剂A、B、C后，比色测定还原糖含量c）空白：无土空白：不加土样，其余操作与样品试验相同，整个试验设置一个，重复一次无基质空白：以等体积水代替基质，每个土样设置一个四、结果计算土壤纤维素酶活性(pg-g-i-(24 h)-i)=(C*V*f)/ dwt式中C为样品的葡萄糖含量(gg-ml-i)； V为土壤溶液体积(30 ml)； f为稀释倍数(25)； dwt为烘干土壤质量(g)五、注意事项(1) 此方法较适用于林地土壤，耕地土壤的测定结果一般较低。
2) 氰化钾为剧毒试剂，接触皮肤的伤口或吸入微量粉末即可中毒死亡与酸接触分解能 放出剧毒的氰化氢气体，与氯酸盐或亚硝酸钠混合能发生爆炸3) 盐分、铵离子、银、草酸锰、氧化物以及氟等含量较高时，会干扰葡萄糖的测定因 此，建议稀释滤液4) 培养时加甲苯与不加甲苯的测定结果一般没有显著性差异5) 测定还原糖时需严格控制体系的pH值，加入还原糖试剂A和还原糖试剂B后，pH 值应该高于10.5，加入还原糖试剂C之后，pH值则应低于26) 含氰化物的溶液可以在碱性条件下用H2O2氧化处理，或者加入强碱性次氯酸盐，反 应24小时后，再用大量水冲入废水系统。