2022年-2023年建筑工程管理行业文档 齐鲁斌创作保健食品功效成分检测技术与方法提纲一．保健食品的检验有关要求二．保健食品理化检验及常用的分析方法介绍三．保健食品功效成分的检测四．保健食品功效成分检测其它有关问题一、保健食品的检验有关要求1、检验依据2、检验要求1、主要检验依据Ø保健食品管理办法（1996年卫生部46令）Ø保健食品注册管理办法Ø卫生部健康相关产品检验机构认定与管理办法（卫法监发［1999］第76号）Ø卫生部发布的与保健食品相关的文件Ø保健食品通用卫生要求（1996年）Ø保健（功能）食品通用标准（GB16740）Ø保健食品检验与评价技术规范（2003年版）Ø食品国标GB/T5009——2003Ø企业标准2、检验要求保健食品检验机构ØCDC系统Ø药检系统检验要求1.保健食品应具有与产品配方和申报的保健功能相适应的功效成分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的功效成分或特征成分检验要求1. 保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配方、工艺等相关资料，要求申报单位检测指定的项目2. 检验机构受理保健食品检测时，申报单位应提供该产品的配方、工艺及企业标准等相关资料3. 保健食品的功效成分检测工作应在SFDA和卫生部原来认定的检测机构进行。
检验要求1. 功效成分或指标性成分、含量及其检验方法u 根据产品及原料确定，应与申报的功能有一定的关系u 功效成分或指标性成分、含量及其检验方法应分别列出u 依据以下二方面确定产品的功效成分（或标志性成分）并说明理由Ø 与申报保健功能有关的功效成分Ø 代表产品特性的标志性成分u 按标准（规范）规定的检测方法检测Ø 无标准检测方法的，应用比较权威的检测方法，并标明方法的出处Ø 无相关检测方法的，申请人应提供详细的检测方法和方法学研究及验证结果研究及验证结果包括检验方法、线性范围、精密度、准确度和至少5批加样回收率等内容及验证报告检验要求功效成分、特征成分、营养成分及卫生学指标的检测方法应根据其产品适用的方法学范围选择以下进行测定：国家标准卫生部部颁标准行业标准国际上权威分析方法检验要求1.在没有相应的标准方法时，企业应建立自己的企业标准自主开发研究的分析方法，申报单位需向检测机构提供方法学研究的相关资料检验要求1. 质量标准u质量标准中文文本编写格式须符合GB／T1.1－2000标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则的规定u内容须包括资料性概述要素（封面、目次、前言）、规范性一般要素（产品名称、范围、规范性引用文件）、规范性技术要素（技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、储存、规范性附录）以及质量标准编写说明u附录中列出检验方法和原料的质量标准检验要求1. 质量标准（续）u 功效成分标示范围，具体标示方法Ø 一般性功效成分（或标志性成分）按≥指标值标示，如总氨基酸、粗多糖、膳食纤维等Ø 功效成分（或标志性成分）需要限定范围的，可按指标值±x%作为限定范围，如总蒽醌、芦荟苷等。
X值依据研制产品的检测资料确定Ø 对于每日摄入量需严格控制的化合物，如褪黑素等，其指标范围上限折算成每日摄入量不得大于允许摄入量Ø 营养素补充剂中维生素类按指标值的0.8-1.8倍确定其指标范围，矿物质按指标值的0.75-1.25倍确定其指标范围u 质量标准编制说明中应详细提供功效成分（或标志性成分）指标值的确定依据及理由二、保健食品理化检验及常用的分析方法介绍1、保健食品常见的检验项目2、保健食品检验常用的分析方法1、保健食品常见的检验项目1. 感官指标（性状）2. 水分3. 灰分4. 净含量与负偏差5. 崩解时限6. 微生物限度7. 重金属（Pb、As、Hg）8. 农药残留量（六六六、滴滴涕）9. 功效成分10. 其它2、保健食品检验常用的分析方法1. 感官检查法2. 物理检查法3. 化学分析法4. 物理化学分析法感官检查法1.主要依靠人的感觉器官，即视觉、嗅觉、味觉等来鉴定被检物质的外观、颜色、气味和滋味等感官检查在对某些保健食品进行卫生学评价时具有重要的意义物理检查法1.测定被测物的物理性质，如密度、旋光、折光率等，用以判定物质的纯度不溶性固形物物化学分析法1.定性分析u化学反应的颜色、沉淀2.定量分析u重量分析Ø挥发法、萃取法、沉淀法u容量分析Ø中和法、氧化还原法、沉淀法、络合滴定法物理化学分析法1. 比色和分光光度法2. 原子吸收分光光度法3. 荧光分析法4. 原子荧光光谱法5. 电位分析法6. 层析法7. 气相色谱法8. 高效液相色谱法物理化学分析法1. IR2. HPCE3. HPLC-MS/MS4. GC-MS/MS5. ICP-MS三、保健食品功效成分的检测（一）、保健食品原料（二）、保健食品功效成分类别和相应检测指标（三）、保健食品功效成分检测方法（四）、保健食品分析方法的建立和析方法学验证（五）、实例分析（一）、保健食品原料1. 普通食品2. 植物类（中草药）3. 动物类4. 真菌类5. 益生菌类6. 核酸类7. 新资源食品8. 营养素9. 其他（三）保健食品类别和功效成分检测指标1、增强免疫力功能多糖（灵芝、虫草、香菇等）、腺苷、氨基酸、人参皂苷类、花粉、党参、黄芪、伏苓、枸杞、人参、阿胶、大枣、灵芝、灵芝孢子粉、桑葚、西洋参、螺旋藻、冬虫夏草、蜂王浆、铁皮石斛、蜂胶、牛初乳、杜仲、银耳、牛膝等2、辅助降血脂功能黄酮类、鱼油（EPA、DHA、DPA）、亚麻酸、亚油酸、绞股蓝皂苷、卵磷脂、山楂、芦荟、丹参、牛磺酸、茶多酚、苦荞粉、钝顶螺旋藻、决明子、维生素E、银杏叶、荷叶、月见草油、沙棘油、红曲制剂、甲壳素、植物甾醇、γ-谷维素等保健食品类别和功效成分检测指标3、辅助降血糖功能苦瓜总苷、三价铬、多糖类、黄酮类、红曲、三七、葛根、泽泻、田七、何首乌、黄芪、黄精、人参、乌梅、知母、生地、决明子、山药、山楂、红花、甘草、有机铬、苦瓜、魔芋精粉、麦芽糖醇、木糖醇、山梨酸糖醇、异麦芽糖醇、乳糖醇、蜂胶、桑叶、D-甘露、糖醇、百合4、抗氧化功能茶多酚、黄酮类、维生素C、硒保健食品类别和功效成分检测指标5、辅助改善记忆功能EPA、DHA、DPA、Ve、磷脂、牛磺酸6、缓解视疲劳功能B-胡萝卜素、叶黄素、维生素类7、促进排铅功能N-葡萄糖基L-半胱氨酸、谷胱甘肽、牛初乳粉、珍珠粉、维生素C、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽、牛磺酸、木糖醇8、清咽功能金银花、胖大海青果、冰片、薄荷脑9、辅助降血压功能黄酮类保健食品类别和功效成分检测指标10、改善睡眠功能褪黑素、松果体素、低聚糖11、促进泌乳功能12、缓解体力疲劳功能人参、西洋参皂苷类、多糖类、维生素类、淫羊藿苷13、提高缺氧耐受力功能角鲨烯、维生素E、角鲨烯、沙棘籽油、枸杞子、黄精、冬虫夏草、螺旋澡、胶股蓝、茶多酚、珍珠粉、牛初乳、党参、红景天、马鹿葺、川芎、当归、刺五加、灵芝、黄芪、三七、银杏叶、红花保健食品类别和功效成分检测指标14、对辐射危害有辅助保护功能红景天、茶多酚、维生素C、当归、蜂胶、原花青素、灵芝、银耳、维生素E、螺旋藻、壳聚糖、枸杞、银杏叶、女贞子、黄芪、香菇、番茄红素、刺五加、β-胡萝卜素等15、减肥功能决明子、芦荟、黄芪、山楂、番泻叶、黄酮、肉碱、大黄酸、茶多酚、荷叶等保健食品类别和功效成分检测指标16、改善生长发育功能钙、锌、Vd、Vb6等17、增加骨密度功能钙、牛磺酸、Vd、Vc18、改善营养性贫血功能Fe，芦荟19、对化学性肝损伤有辅助保护功能黄酮、多糖保健食品类别和功效成分检测指标20、祛痤疮功能栀子、丹皮、银花、薄荷、芦荟、野菊花21、祛黄褐斑功能芦荟、山药、茯苓、薏米22、改善皮肤水份功能23、改善皮肤油份功能保健食品类别和功效成分检测指标24、调节肠道菌群功能益生菌、低聚糖类25、促进消化功能(成人和儿童)山楂、麦芽、鸡内金、山药、党参、莱服子、扁豆、陈皮、伏苓、大枣、木香、神曲、佛手、生地、低聚果糖、牛磺酸、乳酸锌、果寡糖、微晶纤维素、膳食纤维、低聚半乳糖、大豆低聚糖保健食品类别和功效成分检测指标26、通便功能制何首乌、火麻仁、决明子、枳实、莱菔子、桃仁、百合、玉竹、阿胶、芦荟、黄芪、膳食纤维、大豆膳食纤维、低聚果糖、低聚半乳糖、大豆低聚糖、螺旋藻、橘皮、蜂蜜、山楂、几丁聚糖、番泻叶、罗汉果、大黄、甘草、郁李仁、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、燕麦、桑椹、乳酸菌、决明子胶、瓜尔豆胶、阿拉伯胶27、对胃黏膜损伤有辅助保护功能部分常见保健食品原料为主的产品指标检测项目产品类型检测项目营养素补充剂产品中标识的营养素(包括维生素和矿物质)五加科参类皂甙蕈类（灵芝、蘑菇等）膳食纤维冬虫夏草菌丝体腺苷红景天类红景天甙部分常见保健食品原料为主的产品指标检测项目芦荟类芦荟甙大蒜类大蒜素螺旋藻类蛋白质、胡萝卜素、维生素B1、维生素B2茶叶类茶多酚魔芋类膳食纤维部分常见保健食品原料为主的产品指标检测项目纤维素类膳食纤维磷脂类（原料）丙酮不溶物、乙醚不溶物等红曲类洛伐它丁植物油类脂肪酸、维生素E动物油类脂肪酸部分常见保健食品原料为主的产品指标检测项目初乳类免疫球蛋白鹿血类蛋白质、氨基酸蚂蚁类锰、蛋白质蚯蚓类蚓激酶（溶纤酶）、蛋白质蛇、蝎等蛋白质、氨基酸部分常见保健食品原料为主的产品指标检测项目角鲨烯角鲨烯蜂皇浆10-羟基癸烯酸蜂花粉、蜂胶总黄酮甲壳质产品脱乙酰度，产品如为复方应检测原料的脱乙酰度蛋白质、氨基酸制品蛋白质、氨基酸褪黑素产品褪黑素产品原料（褪黑素）需提供原料纯度证明并检测（三）保健食品功效成分检测方法1. 保健食品中红景天甙的测定2. 保健食品中大蒜素的测定3. 保健食品中芦荟甙的测定4. 保健食品中脱氢表雄甾酮（DHEA）的测定5. 保健食品中吡啶甲酸铬的测定6. 保健食品中盐酸硫胺、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定保健食品功效成分检测方法7. 保健食品中肌醇的测定8. 保健食品中肉碱的测定9. 保健食品中α-亚麻酸、γ-亚麻酸的测定10. 保健食品中免疫球蛋白IgG的测定11. 保健食品中人参皂甙的高效液相色谱测定12. 保健食品中原花青素的测定保健食品功效成分检测方法13. 保健食品中核苷酸的测定14. 保健食品中洛伐他丁的测定15. 保健食品中中药功效成分的鉴别方法16. 保健食品中银杏叶总黄酮的高效液相色谱测定17. 保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定18.保健食品中金雀异黄素的测定保健食品功效成分检测方法19.保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定20.五味子类保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定21.保健食品中腺苷的测定22.保健食品中褪黑素的测定保健食品功效成分检测方法23. 保健食品中总皂甙的测定24. 保健食品中总黄酮的测定25. 壳聚糖的游离氨基测定及脱乙酰度的计算26. 蚓激酶活性的测定27. 红曲产品中桔青霉素的测定（四）保健食品分析方法的建立和析方法学验证· 分析方法的选择· 分析方法学验证的内容·分析方法建立实例分析分析方法的选择1. 根据分析对象的性质选择准确、可靠的方法2. 分析方法的科学性，应根据分析方法的评价参数选择可以满足分析需要的分析方法3. 分析方法的实用性，方法应简便易行，样品前处理少、操作不费时、适合大批量样品的测定、同时测定成本低、所用试剂和材料不特殊、种类少、稳定性高、环保、毒性小等。
4. 方法要经过验证和评价分析方法学验证的内容1. 精密度2. 准确度3. 灵敏度4. 检测限5. 检测上限6. 定量限7. 方法的适用范围8. 最佳测定范围9. 选择性和专属性10. 耐用性11. 不确定度评估精密度(precision)1. 在一定条件下对同一被测物多次测定的结果与平均值偏离的程度精密度反映了随机误差的大小常用标准差（S）或相对标准偏差（RSD）表示u平行性（replicability）相同分析方法、样品、实验室、分析人员、分析设备、分析时间u重复性（repeatability）相同分析方法、样品、实验室，但分析人员、分析设备、分析时间中至少有一项不同u再现性（reproducibility）相同分析方法、样品，但实验室，分析人员、分析设备、分析时间均不同精密度平行性重复性再现性备注方法√√√样品√√√地点√√×人员√√××时间√√××分散设备√√××浓度水平333样品（n）999室内室间准确度（accuracy）1.是用一个特定的分析程序所获得的分析结果与假定的或公认的真实值之间符合程度的度量2.准确度反映分析方法的系统误差和随机误差的综合指标3.决定分析结果的可靠程度准确度的评价方法回收率X1-X0P（%）= ————×100MP ——加入的标准物质的回收率M——加入标准物质的量X1——加入标准样品的测定值X0——未知样品的测定值用回收率评价准确度需注意事项1. 不同浓度水平，加入量与样品浓度相近（80%、100%、120%），不能超过方法的线性范围，加标量不得超过待测物含量的3倍。
2. 用回收率评价准确度并非完全可靠形态不同、与其它组分的关系不同3. 选定与被测样品相似的标准参考物更加可靠4. 样品中某些组分对被测成分产生的干扰（正、负），有时很难靠回收率实验发现5. 如果可能，用不同方法比较灵敏度（sensitivity）1.一个方法的灵敏度是指该方法对单位浓度或单位量的待测物质的变化所引起的响应量变化的程度通常工作曲线的斜率（k）用于度量灵敏度A=kc+a检测限（limitofdetection,LOD）1.指对某一特定的分析方法在给定的置信水平内可以从样品中检测到待测物质的最小浓度或最小量即分析方法所能识别的极限分光光度法检测限的确定1.以扣除空白值后的吸光度为0.01相对应的浓度值为检测限2. 标准质量×0.013.检测限= ————————————4. 标准吸光度-空白吸光度色谱法检测限的确定以最低检出量（或浓度）表示检测限S=3NS——最小响应值（峰高或峰面积）N——噪音信号标准物质的量×S最低检出量= ————————————标准物质的响应值注：标准物质的量尽量接近最低检出量，较为准确检测上限（maximumdetectability）指与标准曲线直线部分最高界点相应的浓度值。
当样品中待测物质的浓度值超过检测上限时，无法定量定量限（limitofquantitation,LOQ）1. 定量下限：u在限定误差能满足要求的前提下，用特定分析方法能准确地定量测定待测物质的最小浓度或量通常取SN=10Nu对于消除了系统误差的特定方法来说，精密度要求越高，则定量下限高出检测限越多2. 定量上限：u在限定误差能满足要求的前提下，用特定分析方法能准确地定量测定待测物质的最大浓度或量u对于消除了系统误差的特定方法来说，精密度要求越高，则定量上限低于检测上限越多方法的适用范围1.某一特定方法的检测下限至检测上限之间的浓度范围，在此范围内可作定性或定量的测定最佳测定范围（optimumconcentrationrange）1.亦称有效测定范围，在限定误差能满足要求的前提下，特定方法的测定下限至测定上限之间的浓度范围在此范围内能准确地定量测定待测物质的浓度或量2.最佳测定范围应小于方法的适用范围，对测量结果的精密度要求越高，则相应的最佳测定范围越小检测上限定量上限斜率K=灵敏度定量下限检测限最佳测定范围方法适用范围选择性和专属性1.其它组分的存在不干扰2.一个选择性好的方法是由一系列专属性的测定方法组成的。
耐用性在测定条件有小的变动是，测定结果不受影响的承受程度u样品溶液的稳定性u提取次数、时间uHPLC流动相比例、PH、……（五）、分析方法建立实例分析实例1高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷HPLCdeterminationofIcariineinhealthfood1范围本方法规定了保健食品中淫羊藿苷的测定方法本方法适用于以淫羊藿或淫羊藿提取物为主要原料生产的保健食品中淫羊藿苷的测定原理将粉碎的胶囊内容物、丸剂或液体试样经提取、浓缩等前处理后，根据高效液相色谱紫外检测器定性定量检测试剂除非另有说明，在分析中仅使用重蒸水3.1乙醇分析纯3.2乙腈色谱纯3.3提取液稀乙醇（乙醇546mL→1000mL）3.4淫羊藿苷标准溶液准确称量淫羊藿苷标准品0.012g，加入甲醇溶解并定容至25mL此溶液每mL含0.48mg淫羊藿苷仪器高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV）超声波清洗器高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷HPLCdeterminationofIcariineinhealthfood分析步骤试样处理：固体试样：取20粒以上胶囊、10g以上丸剂试样进行粉碎，混匀，根据样品含量，称取0.5g～2.5g试样（精确至0.001g），精密加入50mL稀乙醇，称重，超声提取60分钟，取出，放冷至室温，用稀乙醇补重，过滤，取续滤液，经0.45μm膜过滤后供液相色谱分析用。
液体试样：取100mL以上液体试样，混匀，精密吸取50mL，减压浓缩至近干，用稀乙醇转移至10mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀经0.45μm膜过滤后供液相色谱分析用液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱：C18柱，5μm，4.6×250mm5.2.2 柱温：20～35℃5.2.3 紫外检测器：检测波长270nm5.2.4 高效液相色谱流动相：乙腈-水（26:74）5.2.5 流速：1.0mL/min5.2.6 进样量：10～20µL5.2.7 色谱分析：取10～20µL试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰面积通过标准曲线计算含量高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷HPLCdeterminationofIcariineinhealthfood淫羊藿苷标准溶液色谱图高效液相色谱法测定保健食品中的淫羊藿苷HPLCdeterminationofIcariineinhealthfood5.3标准曲线制备分别配制浓度为0.004836～1.0104mg/mL的淫羊藿苷标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，进样量10µL，以峰面积对进样量（µg）作标准曲线分析结果的表述由y=a+bx得[（yx-a）/b]×V1×10-3×100X=M×V2式中：X ——试样中淫羊藿苷的含量，g/100g；yx ——试样峰面积；V1 ——试样稀释倍数，mL；M ——试样质量，g；V2——样品进样量，μg。
5.4.2结果表示计算结果保留三位有效数字技术参数准确度方法的回收率在95.0%～105.0%之间允许差平行样相对误差≤2%标准起草说明和方法学验证1仪器及试药1.1仪器1.1.1高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV）岛津2010液相色谱仪；AgiLent1100液相色谱仪；岛津2010/SPD-M液相色谱仪1.1.2超声波清洗器1.2试剂除非另有说明，在分析中仅使用重蒸水纯净水为Milli-Q纯水系统二次制备1.2.1乙醇分析纯1.2.2乙腈色谱纯1.2.3稀乙醇（乙醇546mL→1000mL）1.3样品1.3.1前烈立舒胶囊：澳美制药生产1.3.2中国劲酒：劲牌有限公司生产1.3.3海狗丸：深圳市宝和堂保健品有限公司出品1.4标准品：淫羊藿苷（批号：110737-200414，中国药品生物制品检定所提供）标准起草说明和方法学验证2样品及处理2.1固体试样：取10粒胶囊内容物，混匀，取约0.5g，精密称定；或取10g丸剂，研细，混匀，取约2.5g，精密称定精密加入稀乙醇50mL，称重，超声处理60分钟，放冷至室温，再称重，加稀乙醇补足减失的重量滤过，取续滤液，经0.45μm膜过滤后作为供试品溶液。
2.2液体试样：取100mL以上液体试样，混匀，精密吸取50mL，减压浓缩至近干，用稀乙醇转移至10mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀经0.45μm膜过滤后作为供试品溶液标准起草说明和方法学验证3对照品精密称取淫羊藿苷标准品12.33mg，置25mL量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，作为标准品溶液标准起草说明和方法学验证4线性及范围精密量取标准品溶液0.5mL，1mL、2mL，分别置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀精密量取标准品溶液1mL，2mL，3mL，5mL，10mL，分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀按给定的色谱条件，分别精密吸取稀释后的标准品溶液10μL，注入液相色谱仪，测得峰面积积分值以峰面积积分值为纵坐标，以淫羊藿苷标准品进样量（µg）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：y=2.2260×106x-1.3159×104，r=0.9998淫羊藿苷在0.09864～4.932μg范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系见附图1）标准起草说明和方法学验证1200000010000000800000060000004000000200000000 1 2 3 4 5 6淫羊藿苷进样量（μg）淫羊藿苷标准曲线进样量（μg）峰面积积分值0.098642164520.197284280110.394568504510.493212072990.986421414141.479632356712.46653874794.93211020132峰面积标准起草说明和方法学验证5检测限和定量限5.1检测限精密吸取标准品溶液（浓度为0.009864mg/mL）1.0mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
按上述色谱条件测定，进样量10μL此浓度标准品的峰高为相应噪音的峰高的3倍故本方法的检测限为0.9864×10-3μg标准起草说明和方法学验证淫羊藿苷检测限色谱图标准起草说明和方法学验证5.2定量限精密吸取标准品溶液（浓度为0.009864mg/mL）1.0mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀按上述色谱条件测定，进样量10μL，连续进样5次，结果见下表故本方法的定量限为9.864×10-3μg标准起草说明和方法学验证定量限测定结果进样次数峰面积积分值平均值RSD%124556244121.48%224838324044424025524597标准起草说明和方法学验证16小时内稳定性试验结果6稳定性取同一供试品溶液，按给定色谱条件测定16小时内淫羊藿苷峰面积积分值，数据见表小时峰面积积分值平均值RSD%0119543011817750.90%21171502411719506119025281164955101192283121181783141189009161178808标准起草说明和方法学验证重复性试验结果7精密度7.1重复性取本品(批号:QLS050107)12份（低浓度3份，中间浓度6份，高浓度3份），按样品溶液制备方法制备，依给定色谱条件测定含量试验重复次数取样量（g）含量（g/100g）平均值RSD%10.26741.08691.04562.04%20.24941.074530.24851.057840.49981.040950.50001.044060.50301.003970.50311.041980.50381.023690.50561.0474100.75031.0398110.76021.0399120.75101.0465标准起草说明和方法学验证仪器精密度试验结果7.2仪器精密度取同一供试品溶液，按给定色谱条件重复进样6次，测定峰面积积分值进样次数峰面积积分值平均RSD%1234369223460740.13%2234524032348346423425145235077362345878标准起草说明和方法学验证7.3中间精密度试验3人采用3台不同的设备对同一批（QLS050107批）样品按样品溶液制备方法制备，依给定色谱条件测定含量中间精密度试验结果测定仪器测定结果（g/100g）平均RSD%1岛津2010液相色谱仪1.061.071.42%2AgiLent 1100液相色谱仪1.093岛津2010/SPD-M液相色谱仪1.06标准起草说明和方法学验证8回收率分别精密吸取标准品溶液（精密称取淫羊藿苷29.32mg置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
浓度：0.2932mg/mL）5.0、10.0、15.0mL，置100mL锥形瓶中，挥干溶剂，取本品(批号:QLS050107)0.25g，共9份，按样品溶液制备方法制备供试液，按给定色谱条件测定，计算回收率测得量-样品中含量回收率%=×100%对照品加入量回收率试验结果样品中含量(mg)对照品加入量(mg)测得量 (mg)回收率%平均值总平均%RSD%2.65371.46604.106899.12%98.45%97.76%0.87%2.65374.1338100.96%2.61404.065198.98%2.61404.0913100.77%2.60984.023796.45%2.60983.994194.43%2.77192.93205.614596.95%98.02%2.77195.682199.26%2.66845.570398.97%2.66845.580199.31%2.64335.479796.74%2.64335.483496.87%2.65794.39806.876395.92%96.81%2.65796.940997.39%2.67886.892995.82%2.67886.900996.00%2.63706.939897.84%2.63706.942297.89%标准起草说明和方法学验证9专属性取未加入淫羊藿药材的空白对照样品0.5g，按样品溶液制备方法制备。
按给定色谱条件进行测定，结果未检测出淫羊藿苷的色谱峰标准起草说明和方法学验证专属性色谱图（色谱图从下到上依次为溶剂、缺淫羊藿阴性、淫羊藿苷对照品、样品）标准起草说明和方法学验证10耐用性分别采用3根不同商品规格的色谱柱，对同一批（QLS050107批）样品按试样溶液制备方法制备，依给定测定条件测定含量色谱柱规格测定结果（g/100g）平均RSD%Phenomenx Gemini 5μ，C 110A，18250×4.6mm1.071.060.71%Agilent C，250×4.6mm181.06HiQ Sil C18W，250×4.6mm，No.00W001691.06标准起草说明和方法学验证11不确定度P±0.050P（k=2）标准起草说明和方法学验证12其他有关说明采用已建立的方法，测定了不同配方、不同剂型的保健食品中淫羊藿苷的含量标准起草说明和方法学验证12.1中国劲酒中淫羊藿苷的含量测定供试品溶液的制备精密量取本品50mL，减压浓缩至近干，用稀乙醇转移至10mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀，经0.45µm滤膜滤过，即得标准品溶液的制备精密称取淫羊藿苷标准品12.59mg，置25mL量瓶中加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.5mL，1mL，2mL，分别置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀精密量取对照品溶液1mL，2mL，3mL，5mL，10mL，分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀按给定的色谱条件，分别精密吸取稀释后的标准品溶液10μL，注入液相色谱仪，测得峰面积积分值以峰面积积分值为纵坐标，以淫羊藿苷标准品进样量（µg）为横坐标，绘制标准曲线测定法精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录峰面积积分值，通过标准曲线计算供试品溶液中淫羊藿苷的含量标准起草说明和方法学验证12.2海狗丸中淫羊藿苷的含量测定供试品溶液的制备取本品适量，研细，混匀，精密称取2.5g，精密加入稀乙醇50mL，摇匀，称重，超声处理60分钟，放冷至室温，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，经0.45µm滤膜滤过，即得标准品溶液的制备、标准曲线的制备同“中国劲酒中淫羊藿苷的含量测定”项下测定法精密吸取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积积分值，通过标准曲线计算供试品溶液中淫羊藿苷的含量标准起草说明和方法学验证样品测定结果试样名称含量RSD%中国劲酒-42.40×10 g /100mL0.54%海狗丸-21.28×10 g/100g0.75%标准起草说明和方法学验证其他保健食品色谱图（1-中国劲酒；2-海狗丸；3-淫羊藿苷对照品）保健食品功效成分检测实例分析实例2HPLC-DAD-MS法同时测定保健食品中六种大豆异黄酮类成分的含量天然药物及保健食品概况一．天然药物的特点u 来源广泛u 成分复杂多样u 功效成分不唯一u 质量控制和评价难度大天然药物及保健食品概况二、保健食品的特点u 概念u 来源u 食品、药食同源、维生素、矿物质u 质量和安全性问题u 标准u 功效成分不明确u 违法添加严重u 外源性有害残留物控制u 稳定性、可控性检测u 一致性u 均一性天然药物及保健食品概况三、天然药物及保健食品分析检测的发展趋势u功效性检测u多组分、多成分、多指标、常量、微量、代谢产物u安全性检测u外源性有害残留物检测u内源性有毒物质的检测u稳定性、可控性检测u一致性u均一性色谱质谱技术在天然药物和保健食品分析中的应用一．功效成分检测（常量、微量）二．安全性检测（有害残留、有毒成分）三．稳定性和可控性（指纹图谱技术）HPLC-DAD-MS在天然药物和保健食品分析中的应用介绍大豆异黄酮类成分概况1. 功效和用途：大豆异黄酮作为天然的植物雌激素，具有明显的缓解更年期综合症和抗骨质疏松症的功效，同时又有延缓衰老以及预防心血管疾病，降低乳腺癌、前列腺癌等疾病的发病率等多种功效，近年来引起国内外广泛的关注和研究。
2. 市场概况：我国市场上有关大豆异黄酮类成分的中药、天然药物、植物提取物、保健食品（进口、国产）名目繁多，质量参差不齐3. 标准概况：目前只控制1-2种成分大豆异黄酮类成分概况R 1R 2ROOH中文名称3英文名称R1R2R3大豆苷元DaidzeinOHHH大豆苷DaidzinO-GluHH染料木素GenisteinOHHOH染料木苷GenistinO-GluHOH黄豆黄素GlyciteinOHOCH3H黄豆黄苷GlycitinO-GluOCH3H大豆异黄酮类成分概况1. 目前大豆异黄酮类成分常见的分析方法：u 紫外分光光度法u 薄层扫描法u 高效液相色谱法2. 这些方法在准确性、合理性、可操作性等方面均有欠缺，大多数方法只报道了测定其中1～2个成分的含量，不能较为全面地反应产品的真实质量标准现状S1S2S3S41.多成分同时测定？u对照品u检测成本2.单成分同时测定多成分常规的HPLC法用于多成分分析1、大豆苷2、黄豆黄苷1 2345 63、染料木苷4、大豆苷元5、黄豆黄素6、染料木素色谱条件液相色谱仪：Waters Alliance2690高效液相色谱仪色谱柱：Agilent zorbax SB-C18（4.6×150mm,5μm）柱温：25℃流动相：0.2%甲酸-乙腈（梯度）流速：1 ml/min检测波长：DAD流动相梯度表时间0.2%甲酸（%）乙腈（%）0min901018min782225min782243min703045min5050样品测定CRSS1S3S4S2 S5HPLC-DAD-MS法用于多成分同时测定AB用一个对照品同时测定多个成分——校正因子法校正因子（以染料木素计）化合物浓度(mg/ml)校正因子平均校正因子RSD(%)染料木甙0.2041.351.392.270.4081.380.8161.421.6321.392.041.353.061.42黄豆黄甙0.152.182.122.940.32.050.62.201.22.081.52.142.252.07黄豆黄素0.02561.671.661.460.05121.620.10241.690.20481.640.2561.660.3841.66计算因子（以染料木素计）化合物浓度(mg/ml)校正因子平均校正因子RSD(%)大豆甙0.211.981.942.130.421.920.841.881.681.942.11.993.151.92大豆甙元0.0761.211.212.930.1521.260.3041.170.6081.230.761.181.141.2两种方法测定结果比较中文名称常规法替代法含量(%)RSD ( %)含量(%)RSD ( %)大豆苷0.301.080.321.65黄豆黄苷0.071.830.051.79染料木苷0.621.260.611.05大豆苷元0.861.630.891.22黄豆黄素0.061.960.081.92染料木素0.471.280.461.51以单成分为对照同时测定多成分时，最大的困难——被测成分的识别？？？ABC DEFHPLC-DAD-MS 法MIX-CRS-7212用于多成分同时测定Mix-standard-7212 6: Diode Array36.57280Range: 9.468e-28.0e-26.0e-24.0e-29.6214.4710.58 23.2025.452.0e-21.650.00.00 2.50 5.00 7.50 10.00 12.50 15.00。