第第1919单元单元 生物技术实践生物技术实践1 1、培养基的成分、培养基的成分 一般都含有一般都含有碳源（提供碳元素的物质）、氮源碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）、水和无机盐（提供氮元素的物质）、水和无机盐等营养物质；等营养物质；另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质，特殊营养物质，例如：生长因子例如：生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等的要求等的要求考点考点1 1 微生物的利用微生物的利用一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养课题课题1 12 2、培养基种类及用途、培养基种类及用途划分划分标准标准培养基培养基种类种类特点特点用途用途物理物理性质性质液体液体不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产半固体半固体加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类鉴定观察微生物的运动、分类鉴定固体固体微生物微生物分离、鉴定、计数分离、鉴定、计数化学化学性质性质天然天然 含化学成分不明确的天然物质含化学成分不明确的天然物质工业生产工业生产合成合成培养基成分明确培养基成分明确分类鉴定分类鉴定用途用途选择选择培养基中加入培养基中加入某种化学物质某种化学物质，以以抑制抑制不需要的微生物的生长，不需要的微生物的生长，促进所需促进所需的微生物的生长的微生物的生长培养、分离出特定微生物培养、分离出特定微生物(如培养如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素入青霉素)鉴别鉴别根据微生物的代谢特点，在培根据微生物的代谢特点，在培养基中养基中加入某种指示剂或化学加入某种指示剂或化学药品药品鉴别不同种类的微生物，如用鉴别不同种类的微生物，如用伊红伊红美篮培养基鉴别饮用水美篮培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌或乳制品中是否有大肠杆菌P211 P211 课题课题1 1教材教材 P26 P26 旁栏信息旁栏信息牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基细菌基础培养基，有，有时时又称为普通培养基又称为普通培养基，由于这种培养基中含有一般细菌，由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖。
生长繁殖基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨、基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨、NaCl和琼脂牛肉膏牛肉膏为微生物为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素提供碳源、能源、磷酸盐和维生素,蛋白胨蛋白胨主要提主要提供氮源和维生素供氮源和维生素，而，而NaCl提供无机盐提供无机盐由于此培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀由于此培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其碱将其pH调至调至中性或微碱性中性或微碱性(7.0-7.2)，以利于细菌的生，以利于细菌的生长繁殖物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至100mL100mL 菊花的组织培养菊花的组织培养哺乳动物细胞培养哺乳动物细胞培养培养基类型培养基类型培养环境培养环境营养物质营养物质特殊物质特殊物质温度温度pH光照光照气体气体 选一选一P33 选三选三P46MSMS固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境 葡萄糖葡萄糖、氨基酸、氨基酸、促生长因子、无机盐、促生长因子、无机盐、微量元素等微量元素等矿质元素：大量元素和矿质元素：大量元素和微量元素；有机物：维微量元素；有机物：维生素、甘氨酸、烟酸、生素、甘氨酸、烟酸、肌醇、肌醇、蔗糖蔗糖、琼脂；、琼脂；生长素和细胞分裂素生长素和细胞分裂素多以多以36.536.50.50.5为宜为宜多数多数为为9595空气空气+5+5的的COCO2 2左右左右18-2218-22每日光照每日光照12h12h不同植物不同植物对各种条对各种条件的要求件的要求往往不同往往不同 煮沸消毒法：煮沸消毒法：可以杀死微生物细胞和部分芽孢。
可以杀死微生物细胞和部分芽孢巴式消毒法：巴式消毒法：可杀死牛奶中的微生物，不会破坏其营养成分可杀死牛奶中的微生物，不会破坏其营养成分化学药剂消毒：化学药剂消毒：用用75%75%酒精擦手，用氯气消毒水源酒精擦手，用氯气消毒水源3 3、无菌技术、无菌技术灭菌的方法：灭菌的方法：灼烧灭菌灼烧灭菌：各种：各种金属用具金属用具直接在酒精灯火焰的直接在酒精灯火焰的充分燃充分燃烧层灼烧层灼烧干热灭菌干热灭菌：用于：用于能耐高温的、需要保持干燥的物品能耐高温的、需要保持干燥的物品高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌：主要用于：主要用于能耐高温的物品能耐高温的物品，如金属，如金属器械、玻璃、橡胶及一些药物的灭菌器械、玻璃、橡胶及一些药物的灭菌4 4、用牛肉膏蛋白胨培养基进行大肠杆菌纯、用牛肉膏蛋白胨培养基进行大肠杆菌纯化培养的基本操作程序化培养的基本操作程序 计算计算 称量称量 溶化溶化 灭菌灭菌 倒平板倒平板(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌4 4、用牛肉膏蛋白胨培养基进行大肠杆菌纯、用牛肉膏蛋白胨培养基进行大肠杆菌纯化培养的基本操作程序化培养的基本操作程序(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(2)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌微生物接种微生物接种最常用的方法：最常用的方法：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法。
1.1.平板划线法平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作连续划线的操作，将聚，将聚集的菌种集的菌种逐步稀释逐步稀释分散到培养基的表面分散到培养基的表面在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称的子细胞群体称菌落菌落平板划线法平板划线法 2.2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法 将菌液进行将菌液进行一系列的梯度稀释一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养在稀释度足够高的菌液里在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落菌落稀释涂布平板法操作过程分两个步骤：即稀释涂布平板法操作过程分两个步骤：即系列稀释操作系列稀释操作和和涂布平板操作涂布平板操作系列稀释操作系列稀释操作涂布平板操作涂布平板操作微生物接种的核心是微生物接种的核心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度防止杂菌的污染，保证培养物的纯度例、例、【名师名师P214跟踪训练跟踪训练2】在微生物的实验室纯化培在微生物的实验室纯化培养时，下列操作与杀灭细菌无关的是（）养时，下列操作与杀灭细菌无关的是（）A.A.接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双手接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双手B.B.接种前用火焰灼烧接种针（环）接种前用火焰灼烧接种针（环）C.C.培养基在培养基在5050左右搁置斜面左右搁置斜面D.D.在酒精灯的火焰旁完成倒平板的操作在酒精灯的火焰旁完成倒平板的操作【解析解析】培养基搁置斜面其实是增大接种面积，培养基搁置斜面其实是增大接种面积，是在无菌处理后进行的步骤，与杀灭细菌无关。
是在无菌处理后进行的步骤，与杀灭细菌无关C例、例、【名师名师P214跟踪训练跟踪训练4】（双选）（双选）下列有关微生物的下列有关微生物的接种方法的叙述，正确的是（）接种方法的叙述，正确的是（）A.微生物接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法微生物接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法B.平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作划线的操作C.稀释涂布平板法中的稀释是指将菌液进行一系列梯度稀释涂布平板法中的稀释是指将菌液进行一系列梯度的稀释的稀释D.平板划线操作时，接种环在一次灭菌后可以连续划线平板划线操作时，接种环在一次灭菌后可以连续划线【解析解析】A.A.微生物接种的方法很多，题中的方法是最常用的两种微生物接种的方法很多，题中的方法是最常用的两种方法，除此之外，还有斜面接种和穿刺接种等；方法，除此之外，还有斜面接种和穿刺接种等；D.D.在进行平板划线时，在操作的第一步及每次划线之前都要将在进行平板划线时，在操作的第一步及每次划线之前都要将接种环灼烧灭菌，且划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环接种环灼烧灭菌，且划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。
BC二、土壤中分解尿素细菌的分离与计数课题二、土壤中分解尿素细菌的分离与计数课题2 21.1.筛选菌株的原理与方法筛选菌株的原理与方法(1)(1)原理：原理：微生物的微生物的选择培养选择培养(2)(2)方法：方法：根据目的菌株对生存环境的要求，到根据目的菌株对生存环境的要求，到相应环境相应环境去寻找本实验提供的本实验提供的选择培养基选择培养基(尿素是培养基中唯一的氮源尿素是培养基中唯一的氮源)例、例、【名师名师P P214214跟踪训练跟踪训练5 5】下列所述环境条件下的微下列所述环境条件下的微生物，能正常生长繁殖的是（）生物，能正常生长繁殖的是（）A.A.在加入尿素和葡萄糖的选择培养基上的尿素细菌在加入尿素和葡萄糖的选择培养基上的尿素细菌 B.B.在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌 C.C.在新配制的植物矿质培养液中的酵母菌在新配制的植物矿质培养液中的酵母菌 D.D.在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病毒在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病毒A二、土壤中分解尿素细菌的分离与计数课题二、土壤中分解尿素细菌的分离与计数课题2 22 2统计菌体数目的原理及方法统计菌体数目的原理及方法(1)(1)间接计数法间接计数法(或活菌计数法或活菌计数法)：最常用的最常用的稀释涂布平板法稀释涂布平板法利用特定利用特定细菌计数板细菌计数板或或血细胞计数板血细胞计数板(2)(2)直接计数法：直接计数法：设置重复组：设置重复组：为使结果接近真实值，需将同一稀释度加到为使结果接近真实值，需将同一稀释度加到三个三个或三个以上的平板或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落的上，经涂布、培养，计算出菌落的平均数平均数。
为了保证结果准确，一般选为了保证结果准确，一般选菌落数菌落数在在30-30030-300个个平板进行计数平板进行计数每克土壤样品菌数每克土壤样品菌数=某稀释倍数的菌落平均数某稀释倍数的菌落平均数稀释倍数稀释倍数 细菌培养时所用的稀释液体积细菌培养时所用的稀释液体积最常用的最常用的显微镜直接计数法显微镜直接计数法(1)(1)对分离的菌种作进一步的对分离的菌种作进一步的鉴定鉴定，还需要借，还需要借助助生物化学生物化学的方法2)(2)在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的的 将尿素分解成了将尿素分解成了 氨会使培养基的氨会使培养基的碱性碱性 ，pHpH 因此，我们可以通过因此，我们可以通过检测检测培养基培养基 变化变化来判断该化学反应是否发生来判断该化学反应是否发生3)(3)在以在以 为唯一氮源的培养基中加入为唯一氮源的培养基中加入 指指示剂示剂培养某种细菌后，如果培养某种细菌后，如果pHpH升高，指示升高，指示剂将剂将变变 ，说明该细菌能够，说明该细菌能够 3 3、课题延伸、课题延伸-能分解尿素的细菌的能分解尿素的细菌的鉴定鉴定：脲酶脲酶氨氨增强增强升高升高pHpH尿素尿素酚红酚红红红分解尿素分解尿素教材教材P P2626三、分解纤维素的微生物的分离课题三、分解纤维素的微生物的分离课题3 3 纤维素纤维素是一种由是一种由葡萄糖葡萄糖首尾相连而成的高分子化首尾相连而成的高分子化合物，广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。
合物，广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中纤维素酶纤维素酶由微生物分泌的一种复合酶，包括由微生物分泌的一种复合酶，包括酶酶、酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最，由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖终将纤维素分解成葡萄糖纤维素纤维素酶酶酶酶纤维二糖纤维二糖葡萄糖葡萄糖苷苷 酶酶葡萄糖葡萄糖1 1、纤维素与纤维素酶：、纤维素与纤维素酶：纤维素纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质其是地球上含量最丰富的多糖类物质其中中棉花棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物是自然界中纤维素含量最高的天然产物三、分解纤维素的微生物的分离课题三、分解纤维素的微生物的分离课题3 32 2、实验原理、实验原理(1)(1)刚果红染色法筛选的原理：刚果红染色法筛选的原理：(2)(2)选择培养基与鉴别培养基的应用选择培养基与鉴别培养基的应用 刚果红是一种染料，它可以刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成红色复合物与纤维素形成红色复合物，但，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应当纤维素被纤维素并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应当纤维素被纤维素酶分解后刚果红酶分解后刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解为中心的出现以纤维素分解为中心的透明圈透明圈。
这样我们这样我们可以通过是否可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌产生透明圈来筛选纤维素分解菌三、分解纤维素的微生物的分离课题三、分解纤维素的微生物的分离课题3 33 3、实验设计与操作步骤、实验设计与操作步骤刚果红的染色法有两种：刚果红的染色法有两种：先培养微生物，再加入刚果红先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；进行颜色反应；在倒平板时就加入刚果红在倒平板时就加入刚果红统计微生物菌落数目的方法统计微生物菌落数目的方法微生物接种方法微生物接种方法常见的有常见的有平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法1)(1)稀释涂布平板法稀释涂布平板法(2)(2)显微镜直接计数法显微镜直接计数法 利用利用特定细菌计数板特定细菌计数板或或血细胞计数板血细胞计数板，在显微镜下，在显微镜下计算计算一定容积样品中微生物的数量一定容积样品中微生物的数量，但，但不能区分细菌的不能区分细菌的死活死活排除实验组中排除实验组中非测试因素非测试因素对实验结果的影响对实验结果的影响,提高实验结果的可信度提高实验结果的可信度课本课本P P2222)4 4对照实验的目的及种类对照实验的目的及种类(1)(1)概念：概念：(2)(2)目的：目的：(3)(3)常用的对照方式有：常用的对照方式有：空白对照：空白对照：空白对照是不给对照组任何处理因素。
空白对照是不给对照组任何处理因素标准对照：标准对照：不设对照组，而是用标准值或正常值做对照不设对照组，而是用标准值或正常值做对照的方式阳性对照：阳性对照：是给予对照组以已经证明是一种有效因素的是给予对照组以已经证明是一种有效因素的处理因素处理因素自身对照：自身对照：对照和实验均在同一对象上进行对照和实验均在同一对象上进行相互对照：相互对照：不设对照组，而是几个实验组相互对照，这不设对照组，而是几个实验组相互对照，这种实验又称轮组实验法种实验又称轮组实验法名师名师P P212212指除被测条件指除被测条件(自变量自变量)外，其他条件外，其他条件(无关无关变量变量)都相同的实验都相同的实验例、【名师例、【名师P215跟踪训练跟踪训练6】用来判断选择培养基是否用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是（）起到了选择作用，需要设置的对照是（）A未接种的选择培养基未接种的选择培养基 B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D接种了的选择培养基接种了的选择培养基【解析解析】将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可作为对照牛肉膏蛋白胨培养基可作为对照。
对照实验应遵循的原则之一是对照实验应遵循的原则之一是单一变量原则单一变量原则，所以，所以应与选择培养基一样接种、培养应与选择培养基一样接种、培养C果酒果酒果醋果醋腐乳腐乳泡菜泡菜发酵发酵菌种菌种酵母菌酵母菌醋酸菌醋酸菌毛霉毛霉乳酸菌乳酸菌代谢代谢类型类型异养异养兼性厌氧型兼性厌氧型异养异养需氧型需氧型异养异养需氧型需氧型异养异养厌氧型厌氧型18-25,18-25,pHpH呈呈酸酸性性无氧条件无氧条件重铬酸钾重铬酸钾与其反应与其反应呈灰绿色呈灰绿色30-35,30-35,氧气充足氧气充足品尝、品尝、pHpH试纸检测试纸检测15-1815-18接接种种,酒精含酒精含量控制在量控制在12%12%左右左右常温，常温，无氧条件无氧条件pHpH检测检测,亚亚硝酸盐的硝酸盐的检测方法检测方法考向考向2 2 传统发酵工程技术的应用传统发酵工程技术的应用1 1、果酒与果醋制作的比较、果酒与果醋制作的比较1 1、果酒与果醋制作的比较、果酒与果醋制作的比较果酒果酒果醋果醋腐乳腐乳泡菜、酸奶泡菜、酸奶发酵发酵菌种菌种酵母菌酵母菌醋酸菌醋酸菌毛霉毛霉乳酸菌乳酸菌代谢代谢类型类型异养异养兼性厌氧型兼性厌氧型异养异养需氧型需氧型异养异养需氧型需氧型异养异养厌氧型厌氧型C6H12O6+6O2+6H2O 6CO2+12H2O+能量能量酶酶C6H12O6 2C2H5OH(酒精酒精)+2 CO2+能量能量酶酶C6H12O6CHO酶酶(乳酸乳酸)+能量能量 【例例】(双选双选)小李尝试制作果酒，他将葡萄汁放入已小李尝试制作果酒，他将葡萄汁放入已灭菌的发酵装置中进行试验灭菌的发酵装置中进行试验(见图见图)，恰当的做法是，恰当的做法是 A A加入适量的酵母菌加入适量的酵母菌 B B一直打开阀一直打开阀b b通气通气 C C一直关紧阀一直关紧阀a a，偶尔打开阀，偶尔打开阀b b几秒钟几秒钟 D D把发酵装置放到把发酵装置放到44冰箱中进行试验冰箱中进行试验AC AC 例（例（1010江苏卷）、下图表示果酒和果醋制作过程中的江苏卷）、下图表示果酒和果醋制作过程中的物质变化过程，下列叙述正确的是物质变化过程，下列叙述正确的是 A.A.过程和都只能发生在缺氧条件下过程和都只能发生在缺氧条件下 B.B.过程和都只发生在酵母细胞的线粒体中过程和都只发生在酵母细胞的线粒体中 C.C.过程和都需要氧气的参与过程和都需要氧气的参与 D.D.过程过程-所需的最适温度基本相同所需的最适温度基本相同C C 解析：过程、为酵母菌的呼吸作用，最适宜温度解析：过程、为酵母菌的呼吸作用，最适宜温度约为约为2020左右；的最适宜温度为左右；的最适宜温度为30303535 果酒发酵装置：果酒发酵装置：排出排出 CO2 便于取便于取样检查样检查和和放出放出发酵液发酵液排气口胶管长而弯曲的作用？排气口胶管长而弯曲的作用？防止空气中微生物的污染防止空气中微生物的污染果酒的发酵装置示意图果酒的发酵装置示意图使用该装置使用该装置制酒时制酒时，应该关闭，应该关闭 。
充气口充气口制醋时制醋时，应将充气口，应将充气口 连接气泵，输入氧气连接气泵，输入氧气在醋酸发酵时连在醋酸发酵时连接充气泵进行充接充气泵进行充气用的葡萄汁葡萄汁2 2、腐乳的制作、腐乳的制作(1)(1)毛霉在腐乳制作中的作用：在豆腐的发酵过程中，毛毛霉在腐乳制作中的作用：在豆腐的发酵过程中，毛霉等微生物产生的霉等微生物产生的 能能将将豆腐的豆腐的蛋白质蛋白质分解分解成成 ，脂肪酶脂肪酶可将脂肪水解可将脂肪水解为为 蛋白酶蛋白酶小分子的肽和氨基酸小分子的肽和氨基酸甘油和脂肪酸甘油和脂肪酸(2)(2)毛霉的来源毛霉的来源:传统传统腐乳的生产中，豆腐块上生长的毛腐乳的生产中，豆腐块上生长的毛霉霉来自来自 ，而，而现代现代的腐乳生产是的腐乳生产是在在 的条件下，将的条件下，将 在在豆腐上豆腐上,这样可以避免这样可以避免 ，保证产品的质量，保证产品的质量.(3)(3)腐乳的发酵有多种微生物的协同作用，如腐乳的发酵有多种微生物的协同作用，如 、等，其中起主要作用的是等，其中起主要作用的是 优良毛霉菌种直接接种优良毛霉菌种直接接种其他菌种的污染其他菌种的污染 空气中的毛霉孢子空气中的毛霉孢子严格无菌严格无菌 青霉青霉酵母酵母曲霉曲霉毛霉毛霉毛霉毛霉(4)操作的注意：操作的注意：盐的用量，在瓶口表面盐的用量，在瓶口表面铺盐厚些，以抑制微生物的生长铺盐厚些，以抑制微生物的生长。
卤汤中酒精卤汤中酒精含量控制在含量控制在12左右左右为宜防止杂菌的污染防止杂菌的污染3 3、制作泡菜并检测亚硝酸盐含量、制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 (1)(1)乳酸菌乳酸菌是异养厌氧型细菌，是异养厌氧型细菌，在无氧条件下，将在无氧条件下，将葡萄糖分解成乳酸常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳葡萄糖分解成乳酸常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌，酸杆菌，乳酸杆菌常用于制作酸奶乳酸杆菌常用于制作酸奶2)(2)在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐通过显色反应，在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐通过显色反应，与已知浓度的标准液对比，即可估算样品中的亚硝酸与已知浓度的标准液对比，即可估算样品中的亚硝酸盐含量例、【名师例、【名师P207跟踪训练跟踪训练2】在一个在一个普通的锥形瓶中加入含有酵母菌的普通的锥形瓶中加入含有酵母菌的葡萄糖溶液，如右图所示下图所葡萄糖溶液，如右图所示下图所示的坐标图中不正确的是（）示的坐标图中不正确的是（）【解析解析】葡萄糖的量是一定的，且在发酵的后期酵母葡萄糖的量是一定的，且在发酵的后期酵母菌将会进行无氧呼吸，产生酒精，故酵母菌的数量不菌将会进行无氧呼吸，产生酒精，故酵母菌的数量不可能无限增加可能无限增加。
B例、（例、（20102010山东高考理综）山东高考理综）3434.生物柴油是一种可再生的清洁能源，生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物在微生物M M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）油（如下图）1 1）用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用）用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用_、_方法从油料作物中提取方法从油料作物中提取2 2）筛选产脂肪酶的微生物）筛选产脂肪酶的微生物M M时，选择培养基中的添加的植物油为时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供微生物生长提供_，培养基灭菌采用的最适方法是，培养基灭菌采用的最适方法是_法3 3）测定培养液中微生物数量，可选用）测定培养液中微生物数量，可选用_法直接计法直接计数；从微生物数；从微生物M M分离提取的脂肪酶通常需要检测分离提取的脂肪酶通常需要检测_，以确定，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用其应用价值；为降低生物柴油生产技术，可利用_技术使脂肪酶能够重复使用。
技术使脂肪酶能够重复使用4 4）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNADNA聚合酶催化的聚合酶催化的_技技术PCRPCR压榨压榨萃取萃取碳源碳源高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌显微镜直接计数显微镜直接计数酶活性酶活性（或：固定化细胞）（或：固定化细胞）固定化酶固定化酶 果胶是植物细胞壁及果胶是植物细胞壁及 的主要成分之一，的主要成分之一，它是由它是由 聚合而成的一种高分子化合物，聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水在果汁加工中，果胶不仅会影响出汁率，不溶于水在果汁加工中，果胶不仅会影响出汁率，还会使果汁还会使果汁 一、果胶酶在果汁生产中的作用课题一、果胶酶在果汁生产中的作用课题3 3 1 1、基础知识、基础知识 果胶酶的作用：能够分解果胶，瓦解植物的果胶酶的作用：能够分解果胶，瓦解植物的 及及 ，使榨取果汁变得更容易，而将，使榨取果汁变得更容易，而将果胶分解成可溶性的果胶分解成可溶性的 胞间层胞间层半乳糖醛酸半乳糖醛酸浑浊浑浊细胞壁细胞壁半乳糖醛酸半乳糖醛酸（1 1）果胶和果胶酶）果胶和果胶酶胞间层胞间层 果胶酶的组成：包括果胶酶的组成：包括 、和和 等，因此果胶酶并不是等，因此果胶酶并不是一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称。
一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称多聚半乳糖醛酸酶多聚半乳糖醛酸酶果胶分解酶果胶分解酶果胶酯酶果胶酯酶 纤维素酶纤维素酶由微生物分泌的一种复合酶，包括由微生物分泌的一种复合酶，包括酶酶、酶和葡酶和葡萄糖苷酶萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖考向考向3 3 酶的应用酶的应用酶反应速度用单位时间内、单位体积中反应酶反应速度用单位时间内、单位体积中反应物的物的 或产物的或产物的 来表示2 2、酶的活性与影响酶活性的因素、酶的活性与影响酶活性的因素主要有主要有 、和酶的和酶的 等1 1）酶的活性：）酶的活性：是指酶催化是指酶催化 的能力，的能力，一定化学反应一定化学反应 减少量减少量 增加量增加量 温度温度 pH 抑制剂抑制剂 其高低可以用在一定条件下，酶所催化的其高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反应的速度（速率）来表示某一化学反应的速度（速率）来表示2 2）影响酶活性的因素：）影响酶活性的因素：(3)(3)果胶酶的用量果胶酶的用量 生产果汁时，为了使生产果汁时，为了使果胶酶得到充分的利用，果胶酶得到充分的利用，节约成本，节约成本，需要控制好酶的用量。
需要控制好酶的用量3 3、探究温度、探究温度、pHpH对果对果胶酶活性的影响及果胶酶活性的影响及果胶酶用量的实验设计胶酶用量的实验设计（1 1）原理：）原理：一系列一系列不同温度梯度不同温度梯度或或pHpH梯度梯度或者或者不同含量的不同含量的果胶酶溶液果胶酶溶液，探究果胶酶，探究果胶酶的最适温度、的最适温度、pHpH或果胶酶或果胶酶用量在实验中必须遵循用量在实验中必须遵循单一变量原则单一变量原则2 2）设计方案及流）设计方案及流程（如图）程（如图）（3 3）在实际的操作过程中，需要注意的事项）在实际的操作过程中，需要注意的事项 可以选用可以选用10或以或以5作为温度梯度作为温度梯度苹果、橙子和葡萄等水果都可以作为反应物，苹果、橙子和葡萄等水果都可以作为反应物，水果不用去皮水果不用去皮果泥的用量可以采用果泥的用量可以采用5mL左右，果胶酶的用量可采用质量浓度左右，果胶酶的用量可采用质量浓度为为2%的果胶酶溶液的果胶酶溶液2mL水浴时间可以为水浴时间可以为2030min过滤果汁时，漏斗中应过滤果汁时，漏斗中应放置滤纸放置滤纸探究探究pH对果胶酶活性的影响，只须将温度梯度改成对果胶酶活性的影响，只须将温度梯度改成pH梯度，并梯度，并选定一个适宜的温度进行水浴加热。
反应液中的选定一个适宜的温度进行水浴加热反应液中的pH可以通过体可以通过体积分数为积分数为0.1%的的氢氧化钠或盐酸氢氧化钠或盐酸溶液进行调节溶液进行调节探究果胶酶的用量是建立在探究最适温度和探究果胶酶的用量是建立在探究最适温度和pH对果胶酶活性影对果胶酶活性影响的基础之上的响的基础之上的此时，研究的变量是果胶酶的用量，其他因此时，研究的变量是果胶酶的用量，其他因素都应保持不变素都应保持不变实验时可以配制不同浓度的果胶酶溶液，也实验时可以配制不同浓度的果胶酶溶液，也可以只配制一种浓度的果胶酶溶液，然后使用不同的体积即可可以只配制一种浓度的果胶酶溶液，然后使用不同的体积即可需要注意的是，反应液的需要注意的是，反应液的pH必须相同，否则将影响实验结果的必须相同，否则将影响实验结果的准确性二、探究不同种类的加酶洗衣粉的洗涤效果二、探究不同种类的加酶洗衣粉的洗涤效果 加酶洗衣粉加酶洗衣粉除含有普通洗衣粉的成分外，目除含有普通洗衣粉的成分外，目前常用的酶制剂有多种：前常用的酶制剂有多种：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶，还有复合酶纤维素酶，还有复合酶其中应用最广泛、效果最其中应用最广泛、效果最明显的是明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
碱性蛋白酶和碱性脂肪酶复合酶复合酶 实验测定，单独使用蛋白酶或实验测定，单独使用蛋白酶或淀粉酶，得到的洗涤效果远不如把淀粉酶，得到的洗涤效果远不如把每种酶用量减半后放在一起使用的每种酶用量减半后放在一起使用的效果即给定酶的用量，复合酶的给定酶的用量，复合酶的效果远远超过单一酶的效果效果远远超过单一酶的效果原因是淀粉酶分解了污渍表面原因是淀粉酶分解了污渍表面的淀粉污垢，使蛋白酶能以更有效的淀粉污垢，使蛋白酶能以更有效的方式向蛋白质污垢进攻的方式向蛋白质污垢进攻实验设计实验设计探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果(1)(1)实验原理实验原理生活中的各种污渍主要是蛋白质、脂质、淀粉等多种不生活中的各种污渍主要是蛋白质、脂质、淀粉等多种不溶于水的有机物，这些有机物能在相应的蛋白酶、脂肪溶于水的有机物，这些有机物能在相应的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的作用下水解成易溶于水的小分子有机物酶和淀粉酶的作用下水解成易溶于水的小分子有机物2)(2)遵循原则遵循原则 实验变量为不同种类的洗衣粉，设计时应实验变量为不同种类的洗衣粉，设计时应遵循遵循单一变量原则单一变量原则、对照原则。
对照原则有效的控制其他变量，有效的控制其他变量，如水的用量、污染物的量，如水的用量、污染物的量，所用实验用布的质地、大小，两种洗衣粉的用量，所用实验用布的质地、大小，两种洗衣粉的用量，搅拌及洗涤时间搅拌及洗涤时间将果胶酶与苹果泥分装将果胶酶与苹果泥分装于不同试管，在于不同试管，在1010水浴水浴中恒温处理中恒温处理1010分钟分钟(如图如图A)A)将步骤处理后的果胶酶将步骤处理后的果胶酶和苹果泥混合，再次在和苹果泥混合，再次在1010水浴中恒温处理水浴中恒温处理1010分钟分钟(如图如图B)B)将步骤处理后的混合物过滤将步骤处理后的混合物过滤,收集滤液收集滤液,测量果汁量测量果汁量(如图如图C)C)在不同温度条件下重复以上实验步骤在不同温度条件下重复以上实验步骤,并记录果汁量并记录果汁量,结果如下表结果如下表根据上述实验，请分析回答下列问题：根据上述实验，请分析回答下列问题：(1)果胶酶能破除细胞壁，因为果胶酶可促进细胞壁中果胶酶能破除细胞壁，因为果胶酶可促进细胞壁中_的水解2)实验结果表明，当温度为实验结果表明，当温度为_时果汁量最多，此时果胶酶的时果汁量最多，此时果胶酶的活性活性_。
当温度再升高时，果汁量降低，说明当温度再升高时，果汁量降低，说明_3)实验步骤的目的是：实验步骤的目的是：_温度温度/1020304050607080出汁量出汁量/ml813152515121110果胶果胶40最高最高温度升高，降低了酶的活性温度升高，降低了酶的活性使得酶与果泥处于同一温度条件下使得酶与果泥处于同一温度条件下三、固定化酶和固定化细胞的比较三、固定化酶和固定化细胞的比较原因：原因：细胞个大，酶分子很小细胞个大，酶分子很小个体大的细胞难以被吸附或结合，而个体大的细胞难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋的材料中漏出个小的酶容易从包埋的材料中漏出实验：酵母细胞的固定化实验：酵母细胞的固定化(1)(1)酵母细胞的活化酵母细胞的活化干酵母干酵母+蒸馏水摇匀，放置蒸馏水摇匀，放置1h1h(2)(2)配置的配置的CaClCaCl2 2溶液溶液 （用于使海藻酸钠形成凝胶珠）（用于使海藻酸钠形成凝胶珠）(3)(3)配制海藻酸钠溶液配制海藻酸钠溶液用酒精灯用酒精灯小火或者间断加热小火或者间断加热加热，边加热边搅拌，加热，边加热边搅拌，反复几次，反复几次，直至完全溶化直至完全溶化(4)(4)海藻酸钠溶液和酵母细胞混合海藻酸钠溶液和酵母细胞混合将溶化好的海藻酸钠溶液将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温冷却至室温，再加入以活化，再加入以活化的酵母细胞，进行充分搅拌的酵母细胞，进行充分搅拌(5)(5)固定化酵母细胞固定化酵母细胞（二）用固定化酵母细胞发酵（二）用固定化酵母细胞发酵（一）制备固定化酵母细胞（一）制备固定化酵母细胞葡萄糖溶液葡萄糖溶液+固定好的酵母细胞，固定好的酵母细胞，置于置于2525下发酵下发酵24h24h，观察，观察。
例（例（20102010江苏）江苏）图图1 1表示制备固定化酵母细胞的有关表示制备固定化酵母细胞的有关操作，图操作，图2 2是利用固定化酵母细胞进行酒精发酵的示是利用固定化酵母细胞进行酒精发酵的示意图下列叙述意图下列叙述正确正确的是的是（双选）（双选）A A刚溶化的海藻酸钠应迅速与活化的酵母菌混合制刚溶化的海藻酸钠应迅速与活化的酵母菌混合制备混合液备混合液B B图图1 1中中X X溶液为溶液为CaClCaCl2 2溶液，其作用是使海藻酸钠形溶液，其作用是使海藻酸钠形成凝胶珠成凝胶珠C C图图2 2发酵过程中搅拌发酵过程中搅拌的目的是为了使培养液的目的是为了使培养液与酵母菌充分接触与酵母菌充分接触D D图图1 1中制备的凝胶珠中制备的凝胶珠可以直接转移到图可以直接转移到图2 2装置装置中中BCBC1 1、血红蛋白的提取、血红蛋白的提取(1)(1)凝胶色谱法：凝胶色谱法：(2)(2)电泳：电泳：(3)(3)步骤：步骤：样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定根据根据相对分子质量的大小相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方来分离蛋白质的有效方法，也称做法，也称做分配色谱法分配色谱法。
利用了待分离利用了待分离样品中各种分子带电性质的样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带，使带电分子产生电分子产生不同的迁移速度不同的迁移速度，从而实现样品中，从而实现样品中各种分子的分离各种分子的分离考向考向4 4 生物技术在其他方面的应用生物技术在其他方面的应用单基因遗传病可以通过核酸杂交技术进行早期诊断镰刀型细单基因遗传病可以通过核酸杂交技术进行早期诊断镰刀型细胞贫血症是一种在地中海地区发病率较高的单基因遗传病已胞贫血症是一种在地中海地区发病率较高的单基因遗传病已知红细胞知红细胞正常个体的基因型为正常个体的基因型为BB、Bb，镰刀型细胞贫血症，镰刀型细胞贫血症患者患者的基因型为的基因型为bb有一对夫妇被检测出均为该致病基因的携带者，有一对夫妇被检测出均为该致病基因的携带者，为了能生下健康的孩子，每次妊娠早期都进行产前诊断下图为了能生下健康的孩子，每次妊娠早期都进行产前诊断下图为其产前核酸分子杂交诊断和结果示意图为其产前核酸分子杂交诊断和结果示意图b bB BA该致病基因在常染色体上该致病基因在常染色体上 B1的致病基因来自于的致病基因来自于1，和，和2 C3与与1、2的基因型均相同的基因型均相同 D4号为纯合子的概率是号为纯合子的概率是13一对等位基因经某种限制性核酸内切酶切割后形成的一对等位基因经某种限制性核酸内切酶切割后形成的DNADNA片段长度存在差异，用凝胶电泳的方法分离酶切后的片段长度存在差异，用凝胶电泳的方法分离酶切后的DNADNA片段，并与探针杂交后可显示出不同的带谱。
根据电泳所片段，并与探针杂交后可显示出不同的带谱根据电泳所得到的不同带谱，可将这些得到的不同带谱，可将这些DNADNA片段定位在基因组的某一片段定位在基因组的某一位置上现有一对夫妇生了四个孩子，其中位置上现有一对夫妇生了四个孩子，其中4 4号个体患号个体患病该家庭成员的基因经上述处理后得到的带谱如右图所病该家庭成员的基因经上述处理后得到的带谱如右图所示据图分析，错误的是示据图分析，错误的是D D【20112011广东广东 5 5】.以下关于猪血红蛋白提纯的以下关于猪血红蛋白提纯的描述，描述，不正确不正确的是的是A.A.洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂胞破裂B.B.猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少纯时杂蛋白较少C.C.血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测程的监测D.D.在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢子量较小的杂蛋白移动慢D D(1)(1)细胞内复制细胞内复制DNADNA的条件的条件模板：模板：DNADNA两条母链两条母链原料：原料：4 4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸酶：酶：解旋酶、解旋酶、DNADNA聚合酶聚合酶能量：能量：ATPATP(2)PCR(2)PCR的反应条件的反应条件一定的缓冲溶液一定的缓冲溶液-维持维持pHpH；DNADNA模板模板(或目的基因或目的基因)；分别与两条模板链相结合的分别与两条模板链相结合的两种两种引物；引物；四种脱氧核苷酸；四种脱氧核苷酸；耐热的耐热的DNADNA聚合酶聚合酶；还需要控制温度还需要控制温度2 2、生物体内、生物体内DNADNA复制与复制与PCRPCR反应的区别反应的区别3 3、植物有效成分的提取方法总结、植物有效成分的提取方法总结比较项目比较项目实验原理实验原理方法步骤方法步骤适用范围适用范围水蒸气水蒸气蒸馏法蒸馏法萃取法萃取法压榨法压榨法利用水蒸气将挥利用水蒸气将挥发性较强的植物发性较强的植物芳香油携带出来芳香油携带出来使芳香油溶解在使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸有机溶剂中，蒸发后得到芳香油发后得到芳香油通过机械加压，通过机械加压，压榨出果皮中压榨出果皮中的芳香油的芳香油水蒸汽蒸馏水蒸汽蒸馏分离油层分离油层除水过滤除水过滤粉碎、干燥粉碎、干燥萃取、过滤萃取、过滤浓缩浓缩石灰水浸泡、石灰水浸泡、漂洗漂洗压榨过滤静置压榨过滤静置再次过滤再次过滤适用提取适用提取玫瑰精玫瑰精油、薄荷油油、薄荷油等挥等挥发性强的芳香油发性强的芳香油适用范围广，原适用范围广，原料颗粒尽可能细料颗粒尽可能细小，能充分浸泡小，能充分浸泡在有机溶剂中在有机溶剂中适用于适用于柑橘、柑橘、柠檬柠檬等易焦糊等易焦糊原料的提取原料的提取例、（例、（0909江苏卷）下列关于江苏卷）下列关于DNADNA和蛋白质提取与分离实和蛋白质提取与分离实验的叙述，验的叙述，正确正确的有的有（双选）（双选）A.A.提取细胞中的提取细胞中的DNADNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞 B.B.用不同浓度用不同浓度NaClNaCl溶液反复溶解与析出溶液反复溶解与析出DNADNA可去除蛋可去除蛋白质白质 C.C.蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的的DNADNA D.D.蛋白质和蛋白质和DNADNA都可以用电泳的方法进行分离纯化都可以用电泳的方法进行分离纯化 BD 解析：解析：C C中透析用以除去小分子物质，中透析用以除去小分子物质，DNADNA是大分子物质，是大分子物质，D D是常规方法比如用十二烷基磺酸钠，可以根据其分子是常规方法比如用十二烷基磺酸钠，可以根据其分子大小及所带电荷性质进行分离纯化大小及所带电荷性质进行分离纯化D D项考查凝胶色谱法分离蛋白质的原理，相对分子质项考查凝胶色谱法分离蛋白质的原理，相对分子质量越大的通过凝胶色谱柱的速度越快，故量越大的通过凝胶色谱柱的速度越快，故D D错误。
错误A A正确，洗涤的目的是去除杂蛋白以利于后续步骤的正确，洗涤的目的是去除杂蛋白以利于后续步骤的分离纯化，加入的是生理盐水，缓慢搅拌分离纯化，加入的是生理盐水，缓慢搅拌10min10min，低，低速短时间离心，重复洗涤三次，直至上清液不再呈现速短时间离心，重复洗涤三次，直至上清液不再呈现黄色，表明红细胞已洗涤干净黄色，表明红细胞已洗涤干净B B正确，哺乳动物成正确，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核与众多的细胞器，提纯时杂蛋熟的红细胞没有细胞核与众多的细胞器，提纯时杂蛋白较少C C正确，血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶正确，血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液（如果操作都正确，能清楚的看到血红蛋白集洗脱液（如果操作都正确，能清楚的看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出）这使得血红蛋白的分离过程非常直观，简化了出）这使得血红蛋白的分离过程非常直观，简化了操作例、（例、（20102010安徽）草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病安徽）草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后代，导致产量降低。
品质变差运用微型繁殖技术毒传播给后代，导致产量降低品质变差运用微型繁殖技术可以培育出无病毒幼苗草莓微型繁殖的基本过程如下：可以培育出无病毒幼苗草莓微型繁殖的基本过程如下：外植体外植体 愈伤组织愈伤组织 芽、根芽、根 植株植株请回答：请回答：（1 1）微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取）微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取_作为外植体，其依据是作为外植体，其依据是_ _ _2 2）在过程中，常用的）在过程中，常用的MSMS培养基主要成分包括大量培养基主要成分包括大量元素、微量元素和元素、微量元素和_，在配制好的培养基中，常，在配制好的培养基中，常常需要添加常需要添加_，有利于外植体启动细胞分裂形，有利于外植体启动细胞分裂形成愈伤组织接种后成愈伤组织接种后2-5d2-5d，若发现外植体边缘局部污，若发现外植体边缘局部污染，原因可能是染，原因可能是_3 3）在过程中，愈伤组织在诱导生根的培养基中未）在过程中，愈伤组织在诱导生根的培养基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是形成根，但分化出了芽，其原因可能是_培养基中生长素类与细胞分裂素类的物质用量的比值偏低培养基中生长素类与细胞分裂素类的物质用量的比值偏低茎尖茎尖茎尖病毒极少，甚至无病毒茎尖病毒极少，甚至无病毒有机物有机物植物激素植物激素外植体消毒不彻底外植体消毒不彻底例、（例、（0909广东卷第广东卷第3838题）题）材料：饲料原料中的磷元素有相当材料：饲料原料中的磷元素有相当一部分存在于植酸中，猪、禽等动物由于缺乏有关酶，无法有一部分存在于植酸中，猪、禽等动物由于缺乏有关酶，无法有效利用植酸，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排除后易造成环效利用植酸，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排除后易造成环境有机磷污染。
植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成境有机磷污染植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成为目前重要的饲料添加剂之一为目前重要的饲料添加剂之一1 1）商品化植酸酶主要来自微生物在产酶菌株筛选过程）商品化植酸酶主要来自微生物在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生 ，可根据其，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性活大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间间 表示2 2）利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图：）利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图：透明圈透明圈 植酸钠的消耗量（肌醇和磷酸的生成量）植酸钠的消耗量（肌醇和磷酸的生成量）中的主要成分为中的主要成分为 ；中包含多种酸酶等多中包含多种酸酶等多种蛋白质请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据：种蛋白质请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据：（3 3）为建设基因工程菌，可用）为建设基因工程菌，可用PCRPCR等技术从上述菌株中克隆植等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。
酸酶基因PCRPCR反应包含多次循环，每次循环包括三反应包含多次循环，每次循环包括三步：步：反应过程中打开模板反应过程中打开模板DNADNA双双链的方法是链的方法是 4 4）除植酸酶外，微生物还应用在）除植酸酶外，微生物还应用在 的的生产中2 2）利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图：）利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图：凝胶色谱法：根据蛋白质之间分子大小，吸附性质等差凝胶色谱法：根据蛋白质之间分子大小，吸附性质等差异进行纯化或电泳法：根据蛋白质之间电荷，分子异进行纯化或电泳法：根据蛋白质之间电荷，分子大小等差异进行纯化大小等差异进行纯化小分子杂质小分子杂质变性、复性和延伸变性、复性和延伸加热加热蛋白酶，脂肪酶，蛋白酶，脂肪酶，纤维素酶纤维素酶。