2021年设计性实验年设计性实验组员：吴怡蓉、付世锦、杨有稳、梁燕 患儿，男性，3岁，因面色惨白伴血尿1天入院1天前食用新颖蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色惨白据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况体格检查：体温38，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色惨白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常实验室检查：红细胞 1.981012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5mol/L，结合胆红素13.7mol/L，未结合胆红素71.8mol/L，尿蛋白+，潜血(+)，尿胆红素()，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞实际根据实际根据 溶血性黄疸：由于红细胞的大量破坏，使胆红素产生过多，超越了肝细胞摄取结合的才干，使得尿中尿胆原和尿胆素含量增多葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏，输血不当均会引起病症 蚕豆病：葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏患者大多在食用蚕豆后发生急性溶血性贫血典型病人常出现由于大量红细胞破坏释放出胆红素二导致的溶血性黄疸，恶心呕吐，尿液呈酱油样等病症 诱因：一天前食用蚕豆 既往史：姐姐也曾出现过此病症蚕豆病发病机制 食用蚕豆 产生大量过氧化氢，不被去除 红细胞膜脂质被氧化破坏 急性血管内溶血，产生过多胆红素 导致溶血性黄疸，恶心，呕吐，尿液呈酱油样 6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏使磷酸戊糖途径受阻。
NADPH+H+缺乏致血复原型谷胱甘肽生成缺乏红细胞被破坏，那么可被肝等单核吞噬细胞识别并吞噬，释放血红蛋白，进一步分解为珠蛋白和血红素，而血红素被吞噬细胞降解为胆红素胆红素是人体内原型抗氧化剂，可以清楚超氧化剂和过氧化物自在基，因患儿体内有大量过氧化氢，氧化应激可诱导HO-1的表达，从而添加胆红素的量升高来抵御氧化应激形状患儿正常儿童红细胞1.981012/L 4.010125.310 12/L血红蛋白53g/L 120-140g/L 血清总胆红素85.5mol/L 1.7117.1mol/L 结合胆红素13.7mol/L 03.42mol/L 未结合胆红素71.8mol/L 013.68mol/L 尿蛋白(+)潜血(+)尿胆红素()尿胆素原(+)从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果 主要临床表现：1.血尿、排酱油色尿、面 色惨白 2.皮肤及巩膜黄染 3.体温升高 4.呼吸急促1.血尿、排酱油色尿、面色惨白G6PDGSH的主要作用：的主要作用：维护红细胞内的含硫氢基维护红细胞内的含硫氢基 -SH血红蛋白、酶蛋白和膜血红蛋白、酶蛋白和膜 蛋白的完好性，免遭氧化蛋白的完好性，免遭氧化 与谷胱甘肽过氧化酶共同使与谷胱甘肽过氧化酶共同使 H2O2复原成复原成H2ONADPH+H+红细胞的抗氧化才干红细胞的抗氧化才干GSH红细胞红细胞 膜破裂膜破裂溶血性贫血溶血性贫血面色惨白面色惨白游离游离Hb肾肾 吸收阈值吸收阈值血红蛋白尿血红蛋白尿/含铁血黄素含铁血黄素尿尿2.皮肤及巩膜黄染3.体温升高机理：红细胞破裂 血红蛋白暴露 免疫系统攻击单核-吞噬细胞系统 体温升高4.呼吸急促溶血性贫血 具有载O2才干的Hb含量下降机体缺O2呼吸急促实验设计高铁血红蛋白复原法实验思绪 患者姐姐出现过此类情况推患者姐姐出现过此类情况推测属于家族性遗传，且患者测属于家族性遗传，且患者在食用蚕豆后出现病症，故在食用蚕豆后出现病症，故即有能够为蚕豆病。
即有能够为蚕豆病6-磷酸磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏影响高铁葡萄糖脱氢酶缺乏影响高铁血红蛋白的复原，故可以根血红蛋白的复原，故可以根据如下反响机制设计实验据如下反响机制设计实验亚铁血红蛋白亚铁血红蛋白 高铁血红蛋白高铁血红蛋白高铁血红蛋白复原酶高铁血红蛋白复原酶 NADPH(辅酶辅酶)亚甲蓝亚甲蓝(递氢体递氢体)亚硝酸钠亚硝酸钠实验反响方向 一、实验目的 1、检测患者体内6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性以及发病缘由 2、掌握高铁血红蛋白复原法测6-磷酸葡萄糖脱氢酶的实验原理及方法 3、了解蚕豆病的发病机制及缘由 二、实验原理二、实验原理 在全血中参与亚硝酸钠，使红细胞中的亚在全血中参与亚硝酸钠，使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白MHb,高铁血红蛋白在高铁血红蛋白复原酶的作高铁血红蛋白在高铁血红蛋白复原酶的作用下又被复原为亚铁血红蛋白在这过程用下又被复原为亚铁血红蛋白在这过程中，高铁血红蛋白复原酶不仅需求亚甲蓝中，高铁血红蛋白复原酶不仅需求亚甲蓝作为递氢体，还需求由作为递氢体，还需求由G6PD参与磷酸戊糖参与磷酸戊糖途径构成途径构成NADPH作为辅酶才完成上述反响作为辅酶才完成上述反响。
所以，所以，G6PD缺陷症的患者其缺陷症的患者其MHb复原率下复原率下降分光光度技术降分光光度技术三、实验器材及试剂 器材：离心机、分光光度计、微量移液器 水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管，试管 试剂：0.18mol/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液、0.4mmol/L亚甲蓝溶液、0.28 mol/L 葡萄糖溶液、混合液 等量+、生理盐水、抗凝剂、患者静脉血、蒸馏水 四、实验步骤 1、取静脉血1.8mL 于抗凝管(含0.2 mL109 mmol/L抗凝剂+葡萄糖20 mg，混匀 2、离心沉淀 1000 r/min 15 min 3、调整 血细胞 血浆=1 1，混匀，调整后全血 4、1ml 0.18 mol/L 亚硝酸钠、1ml 0.28 mol/L 葡萄糖溶液 、0.14 mmol/L 亚甲基蓝液，混匀，得到混合试剂1ml 5、取试管3 支,标上A、B、S,按下表参与试剂高铁血红蛋白复原实验操作步骤混合试剂/mL 0.01 /生理盐水/mL /0.01 /0.18 mol/L 亚硝酸钠-/0.010.28 mol/L葡萄糖溶液/mL 经调整的全血/mL 0.1 0.1 0.1来回摇动1520 次,置37 水浴箱静置3 h蒸馏水 10.00ml 10.00ml 10.00ml 试剂 A B SB管为空白管,在波长635 nm处，测定“A管及“S管吸光度 六、实验结果 实验结果计算：计算高铁血红蛋白复原率公式：MHb%=(1-A/S)100%计算出其复原率与正常值比较 七、实验分析 该患者能够患有先天性镰刀贫血症或蚕豆病。
正常的高铁血红蛋白复原率75%，假设计算所得复原率低于75%，且患者姐姐也有类似病症，患者吃过蚕豆后发病，故可推断患者患有蚕豆病 八、本卷须知1、血细胞比容比值过低，高铁血红蛋白复原率降低应将血细胞比容调整到0.35-0.402、细菌污染可产生亚硝酸盐而呵斥假阳性，试管等应无菌3、不稳定Hb、高脂血症等均可出现假阳性结果，故应2h内送检4、标本不应有凝血或溶血，故需运用抗凝管5、在标本内应适当参与葡萄糖，以防止较全血缺乏患者体型瘦小与该病症能否有关，为什么？溶血性贫血红细胞比容下降营养物质运输缺乏缺乏营养体型瘦小。