抗原蛋白纯化流程实施细节1． 将 anti-MYC 单克隆抗体偶联在溴化氢活化的琼脂糖凝胶柱上 （CNBr-activated Sepharose 4B Amersham）1> 透析：使用 NaHCO3 pH=8.3 溶液对 anti-MYC 抗体进行透析，4 度透析过夜 通过 BCA 法测定抗体浓度2> 称取琼脂糖柱冻干粉（ 1g 冻干粉对应 3.5ml 体积）根据琼脂糖凝胶柱：纯化的 anti-MYC 4C5抗体=1ml : 8~10mg的比例称取相应质量的琼脂糖冻干粉使用 1mM HCl 重悬再用水冲洗后用 NaHCO3 pH=8.3 溶液平衡柱料 3〉将激活的琼脂糖凝胶柱和抗体按照上述 2 步骤中偶联比例于4 度混合过夜，进行 偶联4〉漂洗：将偶联柱料填充到层析柱内，使用 5 倍柱料体积的偶联液漂洗 5〉使用 0.1M pH=8.0 Tris-HCl 终止偶联反应6〉漂洗：使用5倍柱料体积的0.1M醋酸（pH=4.0） 0.5M NaCl和0.1M Tris-HCl （pH=8.0） 0.5M NaCl 交替进行漂洗各 3 次7〉柱料保存在 TBS（pH=7.0） +叠氮钠中2． 柱平衡1〉 使用移液器，将 0.5ml 柱料添加入层析柱中。
2〉 使用 5 倍柱料体积的 TBST 冲洗一次3〉 使用 1 倍柱料体积的 pH=3.5 甘氨酸冲洗三次此步骤时间控制在 20 分钟内4〉 使用 10 倍柱料体积的 TBST 冲洗三次5〉 使用 10 倍柱料体积的裂解缓冲液冲洗 2 次3． 使用 500ul 裂解缓冲液重悬柱料4.把细胞裂解液中加入0.5ml柱料，在4度混合2h,进行抗原抗体结合5． 将结合后的柱料添加到层析柱中6. 使用 3ml 细胞裂解液冲洗柱料7. 加入 10 倍体积的 TBST 冲洗三次8. 加入 1ml TBS 重悬柱料9. 加入甘氨酸预洗脱蛋白10. 准备两只 1.5ml EP 管，加入 100 ul 甘油11. 使用1ml甘氨酸进行洗脱，洗脱液收集在上述10步骤中的EP管中 共洗脱两次，每次使用 1ml 甘氨酸进行洗脱12. 使用NaH2PO4 （pH=11）进行中和12. 使用 BCA 法测定蛋白浓度13. 使用SDS-PAGE估算蛋白纯度以及主带蛋白浓度。