一、实验目的一、实验目的 掌握革兰染色的操作技术及油镜的使用掌握革兰染色的操作技术及油镜的使用二、实验二、实验原理原理 -复染色法复染色法1、细胞壁结构差异：、细胞壁结构差异：G菌肽聚糖层数多，结构致密，菌肽聚糖层数多，结构致密，缺乏脂质成分，不易脱色缺乏脂质成分，不易脱色2、等电点差异：、等电点差异：G菌较低，带较多负电荷，与碱性菌较低，带较多负电荷，与碱性染料（结晶紫）结合力牢固，不易脱色染料（结晶紫）结合力牢固，不易脱色3、细胞内容物差异：、细胞内容物差异：G菌中核糖核酸镁盐含量高，菌中核糖核酸镁盐含量高，与染料结合力牢固，不易脱色与染料结合力牢固，不易脱色脂多糖孔蛋白 脂蛋白 肽聚糖 外膜 细胞膜 周浆间隙 肽聚糖磷壁酸细胞壁细胞膜G-G-菌细胞壁菌细胞壁G+G+菌细胞壁菌细胞壁n菌种：菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 n革兰氏染色液：革兰氏染色液：液：结晶紫液：结晶紫 液：卢戈碘液液：卢戈碘液 液：液：95%乙醇乙醇 液：稀释的石碳酸复红液：稀释的石碳酸复红n接种环、载玻片、酒精灯、显微镜接种环、载玻片、酒精灯、显微镜1、制片：、制片：涂片：涂片：取取2-3环生理盐水置载玻片，取少许细菌在环生理盐水置载玻片，取少许细菌在 生理盐水里研磨成生理盐水里研磨成1cm直径的菌膜；直径的菌膜；干燥：干燥：室温自然干燥；室温自然干燥；固定：固定：将载玻片在外焰上快速通过将载玻片在外焰上快速通过3次。
次2、染色：、染色：初染初染1min：结晶紫染覆盖菌膜区，：结晶紫染覆盖菌膜区，1 min，水洗；，水洗；媒染媒染1min：卢戈碘液覆盖菌膜区，：卢戈碘液覆盖菌膜区，1 min，水洗；，水洗；脱色脱色：95%酒精覆盖菌膜区，酒精覆盖菌膜区，20 s，2次，水洗；次，水洗；复染复染30s：稀释石炭酸复红覆盖菌膜区，：稀释石炭酸复红覆盖菌膜区，30 s，水洗，水洗 3、干燥：、干燥：玻片放滤纸间以吸干玻片水分；玻片放滤纸间以吸干玻片水分；4、镜检：、镜检：菌膜区加香柏油，菌膜区加香柏油，油镜油镜下观察五、实验五、实验结果结果G+菌（蓝紫色蓝紫色）G-菌（红色）红色）形态：形态：染色：染色：排列方式：排列方式：Step1 step 2 step 3 step 4革兰染色过程革兰染色过程六、革兰染色法意义六、革兰染色法意义 鉴别细菌鉴别细菌 选择药物选择药物 研究细菌致病性研究细菌致病性七、注意事项七、注意事项n注意注意“无菌操作无菌操作”n涂片时，细菌不宜多涂片时，细菌不宜多n注意控制好脱色程度注意控制好脱色程度。