分光光度法同时测定红酒中柠檬黄和胭脂红一、实验原理当两种吸光物质的吸收光谱互相重叠，且其最大吸收互有干扰时，可依据吸光度的加和性， 通过解联立方程组来进行测定设试样中有A、B两种吸光组分，根据其吸收光谱，确定A、B两种组分的最大吸收波长入和人，然后分别测定两种组分在入和人处的吸收系数，再1 2 1 2分别测量两组分在波长为七和人2处的吸光度值，设为A九和A如解联立方程:AA + B = 8 A cAL + 8 B cBL入 入1 入1 （1）1AA + B = 8 A cAL + 8 B cBL入 入2 入2 （2）2式中，为“、c两色素的质量浓度（ g国）； A；,B, A：B为两种色素在两波长下的吸光度加和值；8A，8A，8B，8B为a、b两色素在不同波长下 A A A A其中， 为吸收系数,M为色素的摩尔质量回收量=加标量后的含量-红酒中的含量 （5）的摩尔吸收系数，根据比耳定律计算 1A A A A A1A1a=—1 2 3 4 5-X —=Z —X 5 ⑶-(4)8c c c c c1 2 3 4 5=a M・...5c回收量=加标量后的含量-红酒中的含量 （5）回收率=回收量x 100% （6）加标量二、仪器与试剂1. 仪器：双光束紫外可见分光光度计；10ml比色管，容量瓶,水浴锅2. 药品：红酒，柠檬黄（标准物质），胭脂红（标准物质），柠檬酸（分析纯），蒸馏水，脱脂 棉、甲醇一甲酸、乙醇一氨溶液三、实验方法1. 标准溶液的配制准确称取柠檬黄和胭脂红0.1000g，用pH为6的蒸馏水溶解，定容100mL，配制成1mg/ml 的储备液，用时适当稀释。
2. 吸收光谱、吸收系数的测定分别准确吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL色素工作溶液，置于10mL比色管中，蒸 馏水定容.在双光束紫外可见分光光度计上，1cm比色皿，蒸馏水为参比，选择重叠扫描 方式，在350-600nm波长范围扫描两色素的吸收光谱.确定其最大吸收波长分别准确吸取一定体积的色素工作液，在分别在测得的两个最大波长处测定柠檬黄、 胭脂红的吸光度值A.据比耳定律，利用工作曲线法，或公式（3）、（4）测定柠檬黄和胭脂红的 吸收系数以，摩尔吸收系数"3. 样品测量将红酒样液加热煮沸除去乙醇，取适量于1cm比色皿，在分光光度计，蒸馏水为参比,两个人处分别测定饮料的吸光度A，计算出红酒中两种色素的含量 max4. 回收率的测定采用加标回收实验，分别准确吸取1mg/mL的柠檬黄、胭脂红标准工作溶液（柠檬黄0.5、 0.6、0.7mL,胭脂红0.1、0.3、0.6mL）,分别置于10 mL比色管中，加红酒至刻度混匀.在 所测得的两个最大波长处分别测定其吸光度值A由式（1）、（2）计算饮料中加标后柠檬黄和 胭脂红的含量，减去饮料中色素的含量得回收量，与加标量相比计算回收率.5. 色素的提取分离取红酒（除去乙醇）适量，加入0.2g脱脂棉及20%柠檬酸溶液，加热至70°C〜80°C, 使合成色素完全被脱脂棉吸附，然后用70C的柠檬酸溶液（pH = 4）洗涤脱脂棉2〜3次， 再用蒸馏水洗涤至中性。
如含天然色素，再用甲醇一甲酸溶液冲洗1〜3次，至洗液无色， 然后用乙醇一氨溶液分次解析全部着色剂，收集全部解析液在水浴上驱氨后，于50ml比 色管中用20%柠檬酸溶液调pH = 6,再加蒸馏水至刻度，混匀待测。