土壤脲酶活性测定（NH4+释放量法）脲酶是酰胺水解酶的一种，在自然界中分布广泛，植物、动物和微生物细胞中均含有此 酶土壤中的脲酶主要来源于微生物和植物脲酶催化尿素的水解反应：在反应过程中，氨基甲酸盐是中间产物脲酶还能够催化羟基脲、二羟基脲、半卡巴脲 等化合物的水解脲酶含有镍，分子量在151, 000 Da〜480, 00 Da之间能够抑制脲酶活 性的化合物有含硼化合物、尿素衍生物、甲醛、原子量大于50 的重金属的盐、含氟化合物、 醌和多元酚、抗代谢剂、杂环硫醇等1 、试验原理通过对新鲜土壤与尿素溶液在 37 °C培养2h后测定氨释放量，估计脲酶的活性（Tabatabai,1994）2、试验仪器50mL 容量瓶；培养箱或恒温水浴；蒸馏定氮仪3、 试验试剂（所用试剂均为分析纯）A、 甲苯©电理）；B、 缓冲液：三（羟甲基）氨基甲烷［c （C2H8O3N3） =0.05mol・L-1, pH9.0］：称取6.1g2833三（羟甲基）氨基甲烷溶入700mL蒸馏水中，用c （H2SO4）=0.2mol • L-1的硫酸溶液调pH 至 9.0，再用蒸馏水定容至 1000mL;尿素溶液{c［CO（NH2）2］=0.2 mol・L-1}:称取1.2g尿素溶入约80mL缓冲液中，后用 该缓冲液定容至100mL。
尿素溶液要当天配制，并在4C下保存备用；氯化钾硫酸银混合溶液［c （KCl）=2.5mol ・ L-1］ —［p （Ag2SO4）=100mg ・ L-1］：先 将100mg Ag2SO4溶于700mL蒸馏水中，再加入188g的KCl （分析纯）使之溶解，在定容 至 1000mL；氧化镁（MgO）：于高温电炉中，将氧化镁在600C-700C温度下灼烧2h,再放置于 干燥器中冷却，贮于瓶中；混合指示剂：溶解0.099g的溴甲酚绿和0.066g甲基红于100mL的乙醇（95% ）中；硼酸指示剂溶液［p （H3BO3）=20g・L-1］：溶解20g硼酸于950mL的热蒸馏水中，冷 却,加入20mL的混合指示剂，充分混匀后，小心滴加氢氧化钠溶液［c（NaOH）=0.1mol・L-1］, 直至溶液呈红紫色（pH约4.5）,稀释成1L；硫酸标准溶液［c （1/2H2SO4） =0.005mol ・ L-1］4、 试验步骤将5.00g新鲜土样（＜2mm）放置于50mL容量瓶中，加入0.2mL甲苯（试剂a）和9mL 缓冲溶液（试剂b）,轻摇混匀后加入1.0mL尿素溶液（试剂c）,再次轻摇混匀并塞上瓶塞。
在37C下培养2h然后加入约35mL的KCl-Ag2SO4溶液（试剂d）,轻摇容量瓶几秒钟后， 放置至室温（约5min）,用KCl-Ag2SO4溶液定容，摇匀同时要仪同样步骤做空白，只是 培养2h后先加35mL的KCl-Ag2SO4溶液，然后加入1.0mL尿素溶液蒸馏法测氨：取土壤悬浮液20mL至蒸馏瓶中，加入0.2g的MgO,用硼酸指示溶液吸 收，蒸馏液的体积约为30mL用c （1/2H2SO4）= 0.005 mol・L-1的H2SO4标准溶液滴定5、 结果计算式中：W （N）—单位时间内氨态氮的释放量，mg • kg-1h-1；c—1/2H2SO4标准溶液的浓度，mol・ L-1；V—H2SO4 标准溶液的体积， mL；ts —分取系数，2.5；14—氮的摩尔质量，mg • mmol-1；2—培养时间，2h；m—样品质量，g；k—水分系数6,注意：a, 与其他缓冲液（如磷酸盐缓冲液）相比，三（羟甲基）氨基甲烷缓冲液优点在于它能够有 效地防止铵的固定在配制该缓冲液时必须用硫酸而不是盐酸来调pH,因为后者能够促进 脲酶的活性；b, 在配制KCl-Ag2SO4溶液时，应将KC1溶于溶解后的Ag2SO4溶液中，因为Ag2SO4在 KC1溶液中不溶。
加入KCl-Ag2SO4混合溶液后脲酶的活性停止，因此该悬浮液在测定氨之 前可以放置 2h方法来源：鲁如坤,土壤农业化学分析方法,北京,中国农业科技出版社,2000.。