毛细管电泳实验常见问题解答一、无样品峰出现A、检查电流是否稳定：① 没有电流可能原因——毛细管堵塞或断裂解决方法——用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流 出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话 可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题缓冲溶液需要过滤，将样 品过滤或者离心去除其中的颗粒② 电流波动很大，直至几乎消失可能原因——缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出解决方法——将缓冲溶液超声脱气，如果还有此现象发生，则可 能是样品区带有析出，可以通过降低样品浓度/延长 ramp time 来试 图解决这一问题；对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲 溶液中加入添加剂以解决此问题③ 电流初始值较小，后逐渐增大可能原因——样品进样量过大解决方法——减少进样量，通常进样参数设置在 0.5psi,5sec 左 右④ 电流正常可能原因：a样品浓度过低：使用高浓度样品测试，如果无法解 决则有可能是以下其他原因b检测波长设置不正确：请确认被分析 物的特征吸收，检查方法中的检测波长设置 c 分离极性错误：对于 蛋白样品，请注意蛋白在分离条件下其PI及所带电荷；对于核酸样 品，通常条件下会带负电荷。
d样品在毛细管内壁吸附：对于蛋白及 核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂 层防止样品吸附 e 光学检测器或光纤损坏：进行标准样品的测试， 如果没有对应的结果出现，则有可能存在硬件问题，请联系工程师B、检查毛细管窗口，是否有透明窗口： 可能原因——忘记开毛细管窗口或窗口位置不正 解决方法——重新开毛细管检测窗口，或将窗口调整到正确位置二、 样品峰出现拖尾 可能原因——样品在毛细管内壁吸附解决方法——对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采 用极端 pH 条件或动态涂层防止样品吸附三、 样品峰形不对称A、检查毛细管入口： 可能原因——毛细管入口切口不平齐解决方法——重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用 力过猛或反复刮擦B、检查更改样品溶剂：可能原因——缓冲溶液与样品溶液电解率差别过大 解决方法——可采用缓冲溶液作为样品溶剂四、 样品峰过宽降低样品进样量：a 有改善：可能原因——样品浓度太大解决方法——可降低样品浓 度或减少进样量b 无改善：可能原因——样品本身性质不均一解决方法——此原因 主要是针对蛋白样品，小分子样品发生的概率较低五、 迁移时间不稳定① 出峰时间不稳定且无规律：可能原因一一缓冲溶液与毛细管内壁平 衡较慢。
解决方法——每次样品运行之间避免用NaOH冲洗毛细管② 出峰时间依次后延：可能原因——样品中有物质易发生吸附解决 方法——首先在每次样品运行之前用0.1N NaOH短时间冲洗毛细管， 看迁移时间能否重复，如果效果不佳请使用涂层毛细管来改善结果或 者将样品再次处理，以去除样品中易吸附的组分六、峰形和出峰时间不稳定更换缓冲溶液种类：① 峰形和时间稳定：可能原因一 冲溶液不稳定，易电解，或者是 样品在原缓冲溶液条件下不稳定解决方法——更换其它种类的缓冲 溶液② 峰形和出峰情况仍不稳定：可能原因——样品中物质易在毛细管内 壁吸附解决方法——可采用涂层毛细管来克服此问题，或对样品进 行前处理七、 电流泄漏(Current Leakage)检查毛细管是否在窗口处断裂① 毛细管断裂可能原因——毛细管内缓冲溶液流出造成电流泄漏 解决方法——更换新毛细管，并用水清洗光纤头及检测窗口② 毛细管无断裂可能原因一一实验环境湿度过大解决方法一一使 用抽湿机，并打开仪器Cartridge Cover；如果没有抽湿机可以使用 空调，在湿度过大的情况下可在仪器关闭时放置干燥剂，但是在仪器 运行时一定要将干燥剂取出八、 无法加气压检查瓶塞是否盖紧或更换瓶塞。
①更换后问题解决可能原因a瓶塞老化，失去弹性解决方法—— 请购买新的瓶塞，并注意瓶塞不可烘干，只能自然晾干 b 瓶颈处有 液体，导致瓶塞易滑解决方法——向瓶中装液体时不要过满，也不 要沾湿瓶颈②若瓶塞无问题，可先采用真空方式，若真空方式可以使用，但压力 仍不可用可能原因——压力系统问题解决方法——请联系工程师九、迁移时间可重复但峰面积重复性不好重新切割毛细管两端① 若问题解决可能原因一一毛细管入口处不平解决方法一一重新 切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦② 问题依然存在，尝试电动进样可能原因一一若电动进样可保持重 现，则压力控制或气路存在问题解决方法一一请联系工程师十、毛细管或电极易折断① 检查瓶盖是否老化可能原因 瓶盖老化解决方法 购买新的瓶盖② 电极是否不垂直可能原因——电极不垂直解决方法——将电极 拉直十一、冷却液泄漏检查卡盒内垫圈和卡子可能原因a：漏装或装错顺序解决办法一一严格按照操作手册上的 安装顺序安装b 仪器内部管路密封不严解决办法——请联系工程师十二、PDA光强低检测窗口 Aperture 型号可能原因——使用了窄细缝的Aperture解决办法 请在使用DAD检测器时务必使用标有8的Aperture。
十三、谱图基线不稳定① 先用 0.1N NaOH 冲洗毛细管，然后不进样运行原方法a 基线改善可能原因——则为样品中物质有吸附解决办法——重 新预处理样品或更改电泳条件b 基线未改善可能原因——毛细管内有强烈吸附，或缓冲体系不稳 定解决办法——更换新的毛细管，不进样，只运行缓冲，观察基线 情况② 更换新毛细管后基线仍然不稳，可采用Run Buffer A测试a 基线改善可能原因——缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢解决办 法——更换缓冲溶液种类，若基线变化对检测无干扰，可保持原来电 泳条件b 基线未改善可能原因——检测光源或其他光学器件不正常解决 办法——请联系工程师。