免疫组化非特异性背景染色及其控制方法一、非特异性染色的识别 常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处，坏死组织及固定不良的组织中心处表现为弥漫性，均匀性 的背景染色也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片（特别是淋巴造血组织，淋巴细胞，单核细胞，组织细胞表面多），主要是和二抗反应，因为一抗一般稀释度均较大，因此Fc受体的干扰基本不存在由于福尔马林固定破坏了大部分的Fc受体, 所以石蜡切片不多见避免方法：① 用以二抗相同种族的正常血清封闭切片；② 用不含Fc段的抗体，但价格贵（V区，C1区不含Fc段，用Pepsin消化）2．静电吸附 抗体是一种带负电荷的球蛋白，容易和带正电荷的组织相结合，如胶原纤维避免方法：① 尽量稀释一抗② 降低抗体的电荷，如用2.5%NaCl, 0.05mTBS代替PBS；③ 用去垢剂 如 triton-100 处理切片 Tween-20 等；3.二抗与组织中的 Ig 结合如羊抗兔的二抗，二抗可以标本中（人）Ig发生交叉反应，科学上越接近的动物，交叉反应越 明显，如人与猴，兔与豚鼠避免方法：用与待测组织相同的 5%的正常血清稀释二抗。
如人血清4．组织中残存醛基与 Ig 的结合 如醛类固定后未能彻底的冲洗，残流醛基可以和 Ig 结合避免方法：①彻底冲洗；② 0.02% 的新鲜的硼氧化钾液处理 10 分钟后冲洗；5．内源性过氧化物酶红细胞，粒细胞的含量尤其高，镜下可以识别，不要将其当成阳性结果避免方法：① 石蜡切片 0.3% 双氧水 - 甲醇溶液处理切片；② 冰冻切片 3% 双氧水处理切片 5 分钟( 99 ： 1 )因为未经固定包埋，大部分酶未被破坏③ 对于骨髓涂片最好用非过氧化物酶标记的抗体如碱性磷酸酶(AP)I磷酸萘酯+水—a-萘酚+偶氮染料I快兰(fast blue)或快红(fast red)I I兰色 红色用明胶甘油封片，不能用含二甲苯的封片剂，溶于二甲苯6. 内源性生物素以 24mg/ml 的卵白素封片 15 分钟；7. 交叉反应PcAb敏感性高，但特异性稍低，容易出现非特异性染色避免方法：①尽可能稀释抗体；②尽可能用 McAb;三、 抗体最大稀释度的求法最大稀释度的目的：1.节约、2•特异性染色T、非特异性染色J （决定其最大稀释度）棋盘法如 稀释度1：50 1；100 1：150 1；200特异性染色 +++ ++ ++ +非特异性染色 ++ + - -。