实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测1临床检验基础与输血教研室唾液中唾液中HABHAB血型物质测定血型物质测定 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测2掌握掌握ABOABO正反定型的原理、方法及正反定型的原理、方法及RhRh血型鉴定血型鉴定通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反定型鉴定定型鉴定ABOABO血型正定型正定型是用已知血型特异性抗体（抗是用已知血型特异性抗体（抗-A-A、抗、抗-B-B、抗、抗-DD等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原；等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原；反定型反定型是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体应的抗体实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测3实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测4小试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、载玻片、记号笔、显微镜1.ABO血型抗体：抗A、抗B；Rh血型抗体：抗D、抗C、抗c、抗E、抗e235A型、B型及O型试剂红细胞3.生理盐水抗凝静脉血 实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测5(1)(1)标记试管：标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明A、B；反定型：取3支小试管分别标记Ac、Bc、Oc。
2)(2)配配5%5%悬浮红细胞：悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，2500r/min离心3分钟，弃上清；重复3次取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红3)(3)加样：加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞4 4）离心：）离心：3000rmin离心15秒（1000g）5)(5)结果：结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测6(1)(1)洁净玻片洁净玻片(鉴定纸板鉴定纸板)一张标A A、B B，分别，分别用滴管滴加用滴管滴加A A、B B试剂试剂1 1滴，再加受检者滴，再加受检者3 35 5红细胞悬液红细胞悬液l l滴，混匀滴，混匀2)(2)另取洁净玻片另取洁净玻片(或鉴定纸板或鉴定纸板)一张标AcAc、BcBc、OcOc，各加受检血清各加受检血清2 2滴，再分别滴加滴，再分别滴加AcAc、BcBc、OcOc悬红悬红1 1滴3)(3)室温轻转动玻片室温轻转动玻片(或鉴定纸板或鉴定纸板)，使血清与细胞充，使血清与细胞充分混匀连续约分混匀连续约2min2min，肉眼观察凝集，肉眼观察凝集(溶血溶血)反应。
玻片反应玻片试验时可用低倍镜观察结果试验时可用低倍镜观察结果实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测7表表l ABOl ABO血型正反定型结果血型正反定型结果实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测8实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测91.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染简述ABO血型鉴定正反不一致的原因实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测10红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测11 掌握掌握RhRh血型鉴定的原理、方法血型鉴定的原理、方法RhRh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗相应的抗C C、抗、抗c c、抗、抗D D、抗、抗E E、抗、抗e e五种五种RhRh分型血清分型血清来检查红细胞抗原来检查红细胞抗原在临床输血中一般只做在临床输血中一般只做D D抗原的鉴定，被检红抗原的鉴定，被检红细胞和抗细胞和抗D D血清凝集者为血清凝集者为RhRh阳性，不凝集者为阳性，不凝集者为RhRh阴阴性实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测12 小试管、滴管、试管架、记号笔、载小试管、滴管、试管架、记号笔、载玻片、显微镜、离心机。
玻片、显微镜、离心机1.Rh1.Rh抗血清：常用的为抗血清：常用的为IgMIgM抗抗D D2.2.己知己知RhRh阳性和阴性的阳性和阴性的5 5红细胞悬液各红细胞悬液各1 1份份3.3.盐水溶液盐水溶液静脉血静脉血实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测131.1.取单克隆抗取单克隆抗-D-D（IgMIgM）-C-C、-c-c、-E-E、-e-e试试剂各剂各1 1滴到滴到5 5支试管中支试管中2.2.每管各加每管各加1 1滴滴3 35 5待检红细胞悬液待检红细胞悬液3.3.充分混匀，以充分混匀，以1000 g1000 g离心离心1515秒4.4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集用肉眼观看凝集5.5.判定结果判定结果实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测141 1如临床上只检查是否为如临床上只检查是否为RhRh阳性，只需用抗阳性，只需用抗D D血清血清进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查2 2因抗因抗e e血清难以得到，故临床上常用四种血清难以得到，故临床上常用四种RhRh抗血抗血清来定型。
清来定型3 3RhRh血型鉴定应严格控制温度与时间，因血型鉴定应严格控制温度与时间，因RhRh抗原抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇应轻轻摇动试管，不可用力振摇4 4如鉴定结果只与抗如鉴定结果只与抗D D血清起反应，而与抗血清起反应，而与抗C C、-c-c、-E-E、-e-e都不凝集，则受检者为都不凝集，则受检者为RhRh缺失型，以缺失型，以-D-D-表示实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测15了解唾液了解唾液HABHAB血型物质测定的原理、方法血型物质测定的原理、方法HAB HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中唾液中血型物质也存在于某些人的分泌液中唾液中HABHAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结合血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集所以利用，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集所以利用凝集抑制试验，可测定唾液中凝集抑制试验，可测定唾液中HABHAB血型物质，它有助血型物质，它有助于于ABOABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测16小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机1.A、B和O型红细胞盐水悬液。
2.最适稀释度抗血清的制备（标化血清）受检者唾液实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测171.1.被检者漱口后留取自然流出的唾液被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml2ml，将留取，将留取的唾液的唾液1000g1000g离心，取上清液置于大试管中，煮离心，取上清液置于大试管中，煮沸沸10min10min，再离心，再离心10min10min，留取上清液备用留取上清液备用2.2.排列试管排列试管3 3支，分别标明支，分别标明-A-A、-B-B、-H-H，3 3管各加唾管各加唾液液1 1滴，每管加相应滴，每管加相应1 1滴3.3.混匀，置室温，中和混匀，置室温，中和10min10min4.4.每管加相应悬红每管加相应悬红1 1滴滴.5.5.混匀，离心混匀，离心1515秒，观察结果秒，观察结果.实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测183 3排排1818支，分别抗支，分别抗A A、抗抗B B及抗及抗H H每排再标每排再标2 2、4 4、8 8、1616每管加盐水每管加盐水5050l l每排第1 1管管对对应应加抗加抗A A抗抗B B及抗及抗H H血清血清5050l l，倍量稀释成，倍量稀释成2 2、4 4、8 8、1616稀释液。
稀释液每每排各管排各管对应对应加加悬红悬红5050l l，振摇混匀，振摇混匀，1000g1000g，离心，离心1515秒以以+为标化血清的最适稀释度为标化血清的最适稀释度实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测19反应物反应物抗管抗管抗管抗管抗管抗管受检唾液受检唾液d dd dd d标化抗标化抗d d标化抗标化抗d d标化抗标化抗d d混匀，室温中和混匀，室温中和10min10min%红细胞红细胞d d%红细胞红细胞d d%红细胞红细胞d d混匀室温放置混匀室温放置10min10min，离心后观察，离心后观察实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测20实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测216.6.取试管两支分别作阳性及阴性对照取试管两支分别作阳性及阴性对照管，各加分泌型和非分泌型唾液管，各加分泌型和非分泌型唾液l l滴滴再加抗再加抗H H最适稀释度血清最适稀释度血清l l 滴，以滴，以3 30 0型红细胞作指示，同时进行试验，阳性型红细胞作指示，同时进行试验，阳性对照应不凝集，阴性对照应凝集对照应不凝集，阴性对照应凝集实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测221如果加热前不离心并如果加热前不离心并除去沉淀除去沉淀，任何可能存在的，任何可能存在的细胞可释放细胞可释放H H物质，使非分泌导致假阳性。
物质，使非分泌导致假阳性2 2欲得到清晰的欲得到清晰的不含粘液的液体不含粘液的液体，最好的办法是将，最好的办法是将唾液冰冻保存数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰唾液冰冻保存数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰冻唾液的活性可保留几年冻唾液的活性可保留几年3 3可用可用5%5%白蛋白白蛋白代替盐水标化代替盐水标化为防止弱分泌型漏检，同时为防止弱分泌型漏检，同时盐水对照试验盐水对照试验，比较，比较二者凝集强度二者凝集强度实验一ABO正反定型及Rh定型唾液血型物质检测23请列表比较红细胞血型系统中的主要请列表比较红细胞血型系统中的主要抗原及产生抗体的异同点抗原及产生抗体的异同点简述正反定型不一致的原因简述正反定型不一致的原因。