实验五实验五苦味酸法测定血清肌酐苦味酸法测定血清肌酐 肌酐（肌酐（CRE）是人体内肌酸代谢的最终产物，由肾排出，少部分）是人体内肌酸代谢的最终产物，由肾排出，少部分来自食物，大部分在体内生成，血肌酐的浓度主要取决于来自食物，大部分在体内生成，血肌酐的浓度主要取决于GFR血肌酐的测定对中晚期肾疾病临床意义较大血肌酐的测定对中晚期肾疾病临床意义较大肌酐测定方法有化学法和酶法肌酐测定方法有化学法和酶法酶法主要有三种类型：酶法主要有三种类型：肌氨酸氧化酶法、肌酐氨基水解酶法和肌酐肌氨酸氧化酶法、肌酐氨基水解酶法和肌酐亚氨基水解酶法亚氨基水解酶法一、实验目的一、实验目的1.掌握血清肌酐的测定原理和方法掌握血清肌酐的测定原理和方法2.了解肌酐测定的参考范围及临床意义了解肌酐测定的参考范围及临床意义二、实验原理二、实验原理 在碱性条件下，血清中的肌酐（在碱性条件下，血清中的肌酐（CreCre）苦味酸反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物检测）苦味酸反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物检测505nm505nm波长波长处吸光度的变化，可知被测血清中的肌酐的浓度其反应式如下：处吸光度的变化，可知被测血清中的肌酐的浓度。
其反应式如下：肌酐肌酐+碱性苦味酸碱性苦味酸 红色物质红色物质OH-1 1、主要器具、主要器具微量移液器微量移液器三、器材三、器材试管与试管架试管与试管架三用水浴箱三用水浴箱可见分光光度计可见分光光度计四、试剂四、试剂1.试剂：试剂：R1R1：氢氧化钠：氢氧化钠 R2 R2：苦味酸：苦味酸 工作液：将工作液：将R1R1与与R2R2按按1 1：1 1的比例混合面成的比例混合面成2.肌酐标准应用液标准应用液(133mol/L)(133mol/L)五、操作步骤五、操作步骤取试管取试管5支，按下表操作支，按下表操作加入物（加入物（ml）空白管空白管标准管标准管测定管测定管(U)S1S2U1U2血清血清0.150.15133mol/L肌酐标准应肌酐标准应用液用液0.150.15生理盐水生理盐水0.15R1R20.750.750.750.750.750.750.750.750.750.75 混匀后，混匀后，37度水浴箱放置，度水浴箱放置，2分钟后，波长分钟后，波长505nm处，空白管调零，先读取处，空白管调零，先读取S1、U1吸光度，吸光度，5分分钟后再读取钟后再读取S2、U2吸光度六、计算六、计算 参考区间：男性：参考区间：男性：62-115mol/L62-115mol/L 女性：女性：53-97mol/L53-97mol/L血清肌酐（血清肌酐（mmol/L）=AU/AS133mol/Lmol/L 七、注意事项七、注意事项 1.血标本无溶血，应及时处理。
血标本无溶血，应及时处理2.工作液开盖混合后，应置工作液开盖混合后，应置2-8度避光保存，稳定期度避光保存，稳定期3天八、临床意义八、临床意义 肌酐经肾小球滤过后不被肾小管重吸收，通过肾小管排泄只有当肌酐经肾小球滤过后不被肾小管重吸收，通过肾小管排泄只有当GFRGFR下降到正常的下降到正常的1/31/3时，时，ScrScr才明显上升，是反才明显上升，是反眏眏GFRGFR减退的后期指标减退的后期指标增高：增高：见于各种原因引起的肾小球滤过功能减退：各种肾病，急慢性肾衰见于各种原因引起的肾小球滤过功能减退：各种肾病，急慢性肾衰竭、重度充血性心力衰竭、心肌炎等竭、重度充血性心力衰竭、心肌炎等降低：降低：见于尿崩症、进行性肌萎缩、白血病、贫血等见于尿崩症、进行性肌萎缩、白血病、贫血等九、方法学评价九、方法学评价1.化学法：即苦味酸法，该法成本低廉，方法简便，但试剂具毒性和腐化学法：即苦味酸法，该法成本低廉，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性2.酶法：准确度和灵敏度高，采用两点速率法，适合于自动生化分析仪酶法：准确度和灵敏度高，采用两点速率法，适合于自动生化分析仪检测。