维生素 EVitamin E王巧群王巧群0101药剂药剂化学名称：（化学名称：（）-2,5,7,8-四甲基四甲基-2-(4,8,12-三甲三甲基十三烷基）基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇 分子式：分子式：C31H52O3 472.75鉴别试验鉴别试验杂质检查杂质检查含量测定含量测定结构与性质结构与性质维生素维生素E主要内容主要内容维生素维生素El维生素维生素E为为-生育酚及其各种酯类生育酚及其各种酯类l分天然品（右旋体）和合成品分天然品（右旋体）和合成品（消旋体）消旋体）一般药用品为合成品，即消旋体一般药用品为合成品，即消旋体l中国药典（中国药典（2000）收录：）收录：Vitamin E Injection;Vitamin E PowderVitamin E Soft Capsules;Vitamin E Tablets维生素的结构维生素的结构l维生素维生素E为苯并二氢吡喃醇衍生物，苯环上有为苯并二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称为生育酚一个乙酰化的酚羟基，故又称为生育酚化学名称为：化学名称为：（）-2,5,7,8-四甲基四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基）三甲基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇醋酸酯。
醋酸酯主要有主要有、和和 等多种异构体，其中以等多种异构体，其中以-异构体的生理活性最强异构体的生理活性最强维生素维生素E E 溶解性溶解性水解性水解性氧化性氧化性紫外吸紫外吸收特性收特性维生素维生素E E的性质的性质l溶解性：黄色或黄色透明的粘稠液体，在溶解性：黄色或黄色透明的粘稠液体，在无水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中易溶，无水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中易溶，在水中不溶在水中不溶l水解性：苯环上含有乙酰化的酚羟基，在水解性：苯环上含有乙酰化的酚羟基，在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离生酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离生育酚，故常作为特殊杂质进行检查育酚，故常作为特殊杂质进行检查维生素维生素E E的性质的性质l氧化性：氧化性：维生素维生素E在无氧条件下对热稳定，加在无氧条件下对热稳定，加热热200 也不破坏，但对氧十分敏感，遇光、也不破坏，但对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化其氧化产物为空气可被氧化其氧化产物为-生育醌和生育醌和-生生育酚二聚体育酚二聚体l紫外吸收特性紫外吸收特性 维生素维生素E中苯环上有酚羟基，固中苯环上有酚羟基，固有紫外吸收，其无水乙醇液在有紫外吸收，其无水乙醇液在284nm的波长的波长处有最大吸收，其吸收系数为处有最大吸收，其吸收系数为41.045.0。
鉴别实验鉴别实验维生素维生素E生育红（橙红色）生育红（橙红色）硝酸反应硝酸反应：维生素维生素E在硝酸条件下，水解生成生育酚，在硝酸条件下，水解生成生育酚，生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红而显橙红色生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红而显橙红色三氯化铁反应三氯化铁反应l原理原理：维生素：维生素E在碱性条件下，水解生成游离在碱性条件下，水解生成游离的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可被的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可被Fecl3 氧化成对氧化成对-生育醌；同时生育醌；同时Fe3+被还原为被还原为 Fe2+，Fe2+与联吡啶生成红色的配位离子与联吡啶生成红色的配位离子l方法方法：取本品约：取本品约10mg，加乙醇制，加乙醇制KOH 试液试液2ml,煮沸煮沸5min,放冷，加水放冷，加水4ml与乙醚与乙醚10ml，振摇，静置使分层；取乙醚液振摇，静置使分层；取乙醚液2ml，加，加2-2-联联吡啶的乙醇溶液吡啶的乙醇溶液(0.5 100）数滴，应显血红）数滴，应显血红色三氯化铁反应三氯化铁反应对-生育酚三氯化铁反应三氯化铁反应血红色紫外光谱法紫外光谱法维生素维生素E的的0.01无水乙醇液，在无水乙醇液，在284nm的波的波长有最大吸收；在长有最大吸收；在254nm的波长处有最小吸的波长处有最小吸收，可供鉴别。
收，可供鉴别薄层色谱法薄层色谱法将供试品点于硅胶将供试品点于硅胶G薄层板上，以环己烷乙薄层板上，以环己烷乙醚（醚（4：1）为展开剂，展开）为展开剂，展开10cm15cm后，后，取出，于空气中晾干，喷以浓硫酸，在取出，于空气中晾干，喷以浓硫酸，在105 加热加热5min，-生育酚醋酸酯和生育酚醋酸酯和-生育醌的生育醌的Rf值分别为值分别为0.5、0.7和和0.9其他方法（鉴别）其他方法（鉴别）l气相色谱法气相色谱法 USP(24)l红外光谱法红外光谱法 BP(2000),JP(14)三、杂质检查三、杂质检查一、酸度一、酸度目的目的：检查维生素：检查维生素E制备过程中引入的游离醋酸制备过程中引入的游离醋酸方法：方法：取乙醇与乙醚各取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚，置锥形瓶中，加酚酞指示液酞指示液0.5ml，滴加，滴加NaOH滴定液（滴定液（0.1ml/L)至微显粉红色，加本品至微显粉红色，加本品1.0g，溶解后，用，溶解后，用NaOH滴定液（滴定液（0.1ml/L)滴定，不得超过滴定，不得超过0.5mlCH.P)二、生育酚二、生育酚来源来源：制备过程中未酯化：制备过程中未酯化原理原理：利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量：利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化。
故在一定条件下以消耗硫酸铈滴定液氧化故在一定条件下以消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L)的体积来控制游离生育酚的限量的体积来控制游离生育酚的限量方法方法：（硫酸铈滴定法）取本品：（硫酸铈滴定法）取本品0.10g,加无水乙醇加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液一滴，用硫酸铈滴定溶解后，加二苯胺试液一滴，用硫酸铈滴定液（液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈滴定液）滴定，消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L)不得过不得过0.5ml.生育酚的检查生育酚的检查l生育酚：生育酚：Ce4+1：2l生育酚的分子量为生育酚的分子量为430.7l中国药典规定维生素中国药典规定维生素E中所含的游离生育酚中所含的游离生育酚 2.15l每每1ml硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.01mol/L）相当于）相当于0.002154g的游离生育酚的游离生育酚l计算计算L=（TV）/S100%=0.0021541.0/0.101002.15含量测定：含量测定：气相色谱法气相色谱法 CH.P（2000）BP(2000)USP(24)高效液相色谱法高效液相色谱法 JP(14)（外标法）（外标法）荧光分光光度法荧光分光光度法鉴别测定方法选择鉴别测定方法选择l鉴别：鉴别：气相色谱法气相色谱法 USP(24)红外光谱法红外光谱法 BP(2000),JP(14)l含量测定：含量测定：气相色谱法气相色谱法 CH.P（2000）BP(2000)USP(24)高效液相色谱法高效液相色谱法 JP(14)（外标法）（外标法）荧光分光光度法荧光分光光度法气相色谱法气相色谱法Ch.p(2000）色谱条件与系统适用性实验色谱条件与系统适用性实验 以硅酮硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2；柱温为265。
理论板数按维生素E计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2校正因子测定校正因子测定：取正三十二烷正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1ml中含1.0ml的溶液，摇匀，作为内标溶液另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul注入气相色谱仪，计算校正因子测定法：测定法：取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml密塞，振摇使溶解，取13ul注入气相色谱仪，测定，计算，即得气相色谱法气相色谱法lBP(2000)虽采用正三十二烷为内标，但虽采用正三十二烷为内标，但Rf 1.4;lUSP(24)采用十六酸十六醇酯为内标，采用十六酸十六醇酯为内标，Rf 1.0高效液相色谱法（高效液相色谱法（JP(14)外标法）外标法）l色谱条件色谱条件色谱柱色谱柱：内径4mm，长15cm30cm的不锈钢柱固定相固定相：填充粒经5um10um的十八烷基硅烷键合硅胶流动相流动相：甲醇-水（49：1）检测波长检测波长：292nm高效液相色谱法高效液相色谱法方法方法：取维生素E供试品和生育酚对照品各约0.05g，精密称定，分别溶于无水乙醇中，并准确稀释至50.0ml，即得供试品溶液和对照品溶液；精密吸取两种溶液各20ul注入高效液相色谱仪，记录色谱图，分别测量维生素E的峰高Hx和Hr供试品中生育酚的量（供试品中生育酚的量（mg)mr Hx/Hrmr为生育酚对照品的量（mg）；Hx和 Hr分别为供试品和对照品中生育酚的峰高。
同步荧光扫描技术同步荧光扫描技术 在同时扫描两个两个单色器波长的情况下，由在同时扫描两个两个单色器波长的情况下，由测得的荧光强度信号与对应的激发波光或发射测得的荧光强度信号与对应的激发波光或发射波长构成光谱图，与通常的荧光法比较具有以波长构成光谱图，与通常的荧光法比较具有以下优点：下优点：1、使光谱简化；、使光谱简化；2、使谱带窄化；、使谱带窄化；3、减小光、减小光谱的重叠现象；谱的重叠现象；4、减少散射光的影响减少散射光的影响同步荧光同步荧光荧光法荧光法 维生素维生素E的荧光峰和溶剂的拉曼光的荧光峰和溶剂的拉曼光谱重叠，影响荧光法的灵敏度及准确性谱重叠，影响荧光法的灵敏度及准确性同步荧光扫描法同步荧光扫描法 选择适当的选择适当的，可有效可有效地消除溶剂拉曼光谱的干扰，提高测定方法的地消除溶剂拉曼光谱的干扰，提高测定方法的灵敏度及准确性灵敏度及准确性同步荧光扫描法同步荧光扫描法l仪器：仪器：日立F-4010型光谱分光光度计l维生素维生素E对照品溶液：对照品溶液：dl-生育酚用正己烷配成1mg/ml，放4 冰箱保存，临用时再用无水乙醇稀释成4.0mg/L方法方法在荧光分光光度计上以发射、激发波长间隔在荧光分光光度计上以发射、激发波长间隔为为40nm，在，在220nm400nm扫描同步荧光光谱，测定同步荧光峰（扫描同步荧光光谱，测定同步荧光峰（337nm）的荧光强度信）的荧光强度信号值。
荧光光度计的工作条件为双狭缝号值荧光光度计的工作条件为双狭缝10nm，响应时间，响应时间2s，扫描速度，扫描速度600nm/min计算计算VE=(FU-FB)/(FS-FB)4.0(mg/L)FU、FB、FS分别为测定、标准和空白管在分别为测定、标准和空白管在VE同步荧光峰同步荧光峰337nm处的荧光强度处的荧光强度USB血清、对照品液、水各0.1ml水0.1ml，无水乙醇0.4ml，混匀30s正己烷2.0ml，混匀60s，离心2min取上清液置1cm石英比色池。